[发明专利]一种提取纯化芸苔抗毒素的方法

说明书

技术领域

 本发明属于植物有效成分提取分离领域，具体涉及一种提取纯化芸苔抗毒素的方法。

背景技术

芸苔抗毒素（Brassilexine）为白色微晶，是一种吲哚生物碱，分子式为C₉H₆N₂S，分子量为174.23，来源于十字花科(Cruciferae)芥菜Brassica juncea L.的叶。药理研究表明，芸苔抗毒素具抗肿瘤作用，抑制人癌细胞生长，其LD50为8μg/mL。在浓度为20μg/mL时，其具细胞毒活性，能100%抑制KB细胞。此外芸苔抗毒素在体外还有抗真菌活性。

芥菜，（学名：Brassica juncea L），是芸苔属一年生或二年生草本。又名雪里蕻。具有宣肺豁痰，温中利气的功效，主治寒饮内盛，咳嗽痰滞，胸隔满闷。耳目失聪、牙龈肿烂、寒腹痛、便秘等病症。性温味辛。入肺、胃、肾经。芥菜含有维生素A、B族维生素、维C和维D等。芥菜含有大量的抗坏血酸，是活性很强的还原物质，参与机体重要的氧化还原过程，能增加大脑中氧含量，激发大脑对氧的利用，有提神醒脑，解除疲劳的作用。

目前对芥菜化学成分研究较少，尚未见芸苔抗毒素的相关提取研究报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种提取纯化芸苔抗毒素的方法，该方法工艺简单、污染小、得率高、产品纯度高。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

以芥菜叶为原料，投入萃取釜中，采用超临界CO₂萃取2-4小时，收集萃取物，用氨水调节pH至9，加入二氯甲烷萃取，二氯甲烷萃取液加入氧化铝中压柱，水洗至中性，再用二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脱，TLC跟踪检测，收集高浓度流分，回收试剂，干燥得芸苔抗毒素产品。

所述超临界CO₂萃取条件为：萃取温度为35-55℃，萃取压力为20-28MPa，分离釜Ⅰ温度为25-45℃，压力为10-18MPa，分离釜Ⅱ温度为20-35℃，压力为4-8MPa。

所述氧化铝为中性氧化铝，目数为200-400目。

所述二氯甲烷-甲醇梯度洗脱顺序为：依次按体积比二氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2进行洗脱。

本发明的有益效果在于：采用超临界CO₂萃取，具有操作温度低，选择性好，操作条件较温和，制取的产品纯度高，萃取无残留，是一种高效环保的萃取方法；采用中压氧化铝柱分离，可进行大量制备；本发明工艺稳定，可用于工业化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将芥菜叶粉碎，过20目筛，称取10kg加入萃取釜中，开启机器，调节参数：萃取温度为35℃，萃取压力为28MPa，分离釜Ⅰ温度为25℃，压力为18MPa，分离釜Ⅱ温度为20℃，压力为8MPa，以40L/h的流速通入CO₂萃取2小时，解析萃取物，用氨水调节pH至9，再加入二氯甲烷萃取多次，收集合并二氯甲烷萃取液，减压浓缩后加入氧化铝中压柱（400目的中性氧化铝，柱径高比为1:5），依次按体积比二氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2进行洗脱，TLC跟踪检测，收集高浓度流分，回收试剂，干燥得芸苔抗毒素产品408mg，含量为95.3%。

实施例2：

将芥菜叶粉碎，过20目筛，称取10kg加入萃取釜中，开启机器，调节参数：萃取温度为55℃，萃取压力为20MPa，分离釜Ⅰ温度为45℃，压力为10MPa，分离釜Ⅱ温度为35℃，压力为8MPa，以40L/h的流速通入CO₂萃取4小时，解析萃取物，用氨水调节pH至9，再加入二氯甲烷萃取多次，收集合并二氯甲烷萃取液，减压浓缩后加入氧化铝中压柱（200目的中性氧化铝，柱径高比为1:7），依次按体积比二氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2进行洗脱，TLC跟踪检测，收集高浓度流分，回收试剂，干燥得芸苔抗毒素产品375mg，含量为89.3%。

实施例3：