[发明专利]一种果蔬组织及其相关制品中还原型抗坏血酸和异抗坏血酸的分离测量的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析领域,涉及一种果蔬组织及其相关制品中还原型抗坏血酸和异抗坏血酸的分离测量的方法。

背景技术

维生素C(以下简称Vc)，又叫抗坏血酸，是一种己糖衍生物。维生素C具有很高的医用价值，是维持机体正常生命活动所必需的一类小分子有机化合物，可参与体内氧化还原反应和氧化还原信号传递与调节，Vc具有解毒作用，人体若严重缺乏会引起坏血病。人体自身不能合成维生素C，必须从食物中摄取。维生素C广泛存在于新鲜水果、蔬菜中。因此在果蔬Vc代谢、氧化还原信号传递等生理过程的研究及种质资源研究、品种育种、贮藏加工和果品质量监测中，经常需要测定Vc含量。Vc包括还原型Vc、氧化型Vc和异抗坏血酸，新鲜果品中以还原型Vc为主。

现有的Vc测定方法主要是全量测定法(测定还原型Vc和氧化型Vc的总含量，如荧光法和2,4-二硝基苯肼法等)和还原型Vc测定法(如2,6-二氯靛酚滴定法、电位滴定法、碘滴定法、钼蓝比色法、碘酸钾萃取分光光度法等)两类。这些方法操作繁杂、容易受到果蔬组织中一价铜离子、亚铁离子、单宁、半胱氨酸、谷胱甘肽、维生素E、色素等物质的影响，分析测量不精确，而且不能很好的区分还原型抗坏血酸、氧化型抗坏血酸和异抗坏血酸。近几年发展起来的用气相色谱、液相色谱分析鉴定抗坏血酸的方法能够克服传统化学方法的不足，尤其是高效液相色谱被广泛的应有到抗坏血酸的分析测量中，通过对材料的衍生化处理，高效液相色谱能精确的分析鉴定还原型抗坏血酸和氧化型抗坏血酸。尽管这些方法能够精确的分析鉴定抗坏血酸，但是这些方法都比较费时，抗坏血酸是一种不稳定的活泼分子，离体条件下极易被氧化降解，造成分析测量的误差。一种可靠的抗坏血酸测量方法应该能够准确的测量植物组织中抗坏血酸的含量，同时要能够鉴定还原型抗坏血酸、氧化型抗坏血酸和异抗坏血酸。

发明内容

本发明的目的是提供一种果蔬组织及其相关制品中抗坏血酸和异抗坏血酸的分离测量的方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现:

一种果蔬组织及其相关制品中抗坏血酸和异抗坏血酸的分离测量的方法，包括如下步骤：

(1)备料：以新鲜的果蔬组织或其制品为原料，在液氮中研磨成匀浆；

(2)提取：以料液比1:5-10（g/ml）的比例加入提取还原液，35-40℃提取60分钟，得到含有抗坏血酸提取液，提取液经过离心机以5000r/min的速度进行固液分离，获得上清液；残渣用相同的条件重复提取一次，合并两次上清液；

(3)上清液用0.45微米尼龙膜过滤，过滤液作为色谱分析的待测样品；

(4)取5-10μL的上述样品上色谱柱进行分离测量，色谱条件是：采用TSKgel-Amide-80色谱柱(4.6mm×100mm)，流动相为乙睛(B相)和0.1%的酸溶液(A相)，梯度洗脱条件：0-7min B相:A相体积比为90:10，7-8min B相:A相体积比为20:80，8-13min B相:A相体积比为20:80，13-14min B相:A相体积比为90:10，14-20min B相:A相体积比为90:10；流速为0.6-0.8mL/min，柱温为25-30℃，检测波长为244nm；

（5）利用外标法根据标准曲线计算样品还原性抗坏血酸和异抗坏血酸的含量。

所述的提取还原液是由4-7%（g/100ml）偏磷酸，2mM磷酸三-(β-氯乙基)酯(TCEP)和2mM乙二铵四乙酸钠组成。

所述的0.1%（V/V）的酸溶液所用的酸包括甲酸、乙酸或三氟乙酸。

有益效果：

本发明提供一种可靠的抗坏血酸测量方法，能够有效的分离水果、蔬菜及其相关制品中还原型抗坏血酸和异抗坏血酸，准确的测量植物组织中还原型抗坏血酸和异抗坏血酸的含量。传统的维生素C的测量方法不能将抗坏血酸和异抗坏血酸有效的分开，因此测量结果受到异抗坏血酸的干扰。本发明开发采用的正相亲水色谱柱的分离条件，能够有效的将还原型抗坏血酸和异抗坏血酸分离开来（图1），并利用外标法对样品中的含量进行定量分析。该放方法简便易行，可广泛的应用于水果、蔬菜及其相关的制品的抗坏血酸分析测试中。

附图说明

图1供试样品的色谱分离图(峰1为异抗坏血酸，峰2为还原性抗坏血酸)。

图2为还原性抗坏血酸的标准曲线。

图3为异坏血酸的标准曲线。

具体实施方式

下面通过对具体实施例的描述，对本发明作进一步详细说明。