[发明专利]一种固定化呈递免疫共刺激分子的微球及其制备方法

权利要求书

1.一种固定化呈递免疫共刺激分子的微球，其特征在于，包括疏水性的纳米级或微米级的微球，微球表面上呈递有递免疫共刺激分子，免疫共刺激分子通过亲脂蛋白或疏水结合结构域与微球相连接。

2.如权利要求1所述的固定化呈递免疫共刺激分子的微球，其特征在于，所述的免疫共刺激分子与亲脂蛋白或疏水结合结构域是由融合基因表达并纯化的融合蛋白，免疫共刺激分子与亲脂蛋白或疏水结合结构域之间还设有连接肽；

融合蛋白通过亲脂蛋白或疏水结合结构域与疏水性的微球表面的相互作用，将免疫共刺激分子固定化呈递于微球表面。

3.如权利要求1或2所述的固定化呈递免疫共刺激分子的微球，其特征在于，所述的微球是由疏水性高分子材料制备的，疏水性高分子微球材料为PHA，由聚羟基丁酸酯、聚羟基辛酸酯、聚羟基癸酸酯、羟基丁酸-羟基戊酸共聚酯、羟基丁酸-羟基己酸共聚酯、羟基丁酸-羟基辛酸共聚酯、羟基丁酸-羟基戊酸-羟基己酸共聚酯中的一种或几种聚合而成；

或者疏水性高分子微球材料为聚乳酸、羟基己酸和乳酸共聚物中的一种；

或者疏水性高分子微球材料为聚己内酯，由聚甲基丙烯酸甲酯、聚己内酯、聚己二醇中的一种或几种聚合物组成。

4.如权利要求1或2所述的固定化呈递免疫共刺激分子的微球，其特征在于，所述的亲脂蛋白为PhaP、PhaZ、PhaR、PhaC中的一种，所述的疏水结合结构域为PhaP、PhaZ、PhaR、PhaC中疏水结合结构域中的一种。

5.如权利要求1或2所述的固定化呈递免疫共刺激分子的微球，其特征在于，所述的免疫共刺激分子选自B7-1、B7-2、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、ICOS中的一种或几种。

6.如权利要求2所述的固定化呈递免疫共刺激分子的微球，其特征在于，所述的连接肽的长度为10～15个氨基酸残基。

7.如权利要求2所述的固定化呈递免疫共刺激分子的微球，其特征在于，所述的微球为由可降解的疏水性PHA材料制成，所述的融合蛋白为B7-2-PhaP，连接肽为G4SG3SG2S。

8.一种固定化呈递免疫共刺激分子的微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）免疫共刺激分子-亲脂蛋白融合蛋白的构建：分别扩增待呈递的免疫共刺激分子、亲脂蛋白的核苷酸序列，并通过PCR扩增技术将两者通过连接肽连接得到融合基因；然后通过基因的剪切和连接，构建成表达载体并在转染宿主细胞，诱导表达载体在宿主细胞中表达；裂解细胞并通过蛋白提纯得到免疫共刺激分子-亲脂蛋白融合蛋白；

2）疏水性微球的构建：将PVA溶液至于冰浴中，然后加入溶解有高分子疏水材料聚合物的氯仿溶液，超声处理5～10min后，再在磁力搅拌器上温和搅拌5～10h，离心收集微球，并用水充分洗涤；最后用水重悬微球；

3）负载结合：将融合蛋白用水溶解后，加入到微球的悬浮液中，混匀，4℃搅拌过夜；离心，收集微球，得到融合蛋白负载的微球。