[发明专利]试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法

权利要求书

1.试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，包括以下步骤：

第一步、冻融破壁：将蓝藻脱水分，制得藻泥；将藻泥先冷冻冻结，再取出融化，冻融至少两次；

第二步、絮凝提取：用水稀释冻融后的藻泥，混匀得到藻浆，其中藻泥与水的质量比为0.5-1.5∶100；向藻浆中加入质量浓度5-15％的聚合氯化铝溶液并混匀得到混合液，其中聚合氯化铝溶液与藻浆的质量比为0.5-1.0∶100；混合液静置分层，取蓝色上清液即得藻蓝蛋白粗提液；

第三步、分段盐析：向藻蓝蛋白粗提液中加入固体硫酸铵或硫酸铵溶液使硫酸铵饱和度达到15-25％；随后静置、离心后弃去沉淀得上清液，向其中加入固体硫酸铵或硫酸铵溶液使硫酸铵饱和度达到45-55％；随后静置、离心后弃去上清液得沉淀；将所得沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，得藻蓝蛋白溶液；

第四步、透析：将所得藻蓝蛋白溶液置透析袋中，以磷酸盐缓冲液为透析液进行透析；透析后将藻蓝蛋白溶液离心弃去沉淀得上清液，即得透析后藻蓝蛋白溶液；

第五步、纯化：向透析后藻蓝蛋白溶液中加入聚乙二醇和混合磷酸钾盐，使聚乙二醇的质量浓度达到10-13％、并使混合磷酸钾盐的质量浓度达到10-12％，所述混合磷酸钾盐由磷酸二氢钾和磷酸氢二钾构成；搅拌均匀，静置分层后取深蓝色上清液，即得试剂级藻蓝蛋白溶液。

2.根据权利要求1所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第一步中，所述藻泥的干物质含量为质量比2-15％，所述藻泥置于-18℃～-35℃下冷冻冻结。

3.根据权利要求2所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第二步中，混合液静置至少12小时；第三步中，两次静置分别至少12小时。

4.根据权利要求3所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第三步中，离心转速分别为5000转/分钟，离心时间分别为3分钟；第四步中，离心转速为5000转/分钟，离心时间为5分钟。

5.根据权利要求4所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第四步中，透析至少12小时，透析过程中至少更换三次透析液。

6.根据权利要求5所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第五步中，搅拌至少1小时。

7.根据权利要求1至6任一项所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第三、第四步中，磷酸盐缓冲液分别为含有0.001-0.002mo l/L PBS，0.002-0.03mol/L NaCl，0.001-0.002mol/L EDTA，pH＝6.8的缓冲液。

8.根据权利要求7所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第四步中，磷酸盐缓冲液为含有0.001mol/L PBS，0.002mol/L NaCl，0.001mol/L EDTA，pH＝6.8的缓冲液。

9.根据权利要求1至6任一项所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第五步中，所述混合磷酸钾盐中，磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的质量比为1∶1.5-2.5。

10.根据权利要求1至6任一项所述的试剂级藻蓝蛋白规模化制备方法，其特征是，第四步中，所述透析袋为10万道尔顿透析袋；第五步中，聚乙二醇溶液为PEG4000。