[发明专利]特定肉制品的LAMP法检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.特定肉制品的LAMP法检测试剂盒，包括五组相互独立的A型反应液，该五组相互独立的A型反应液是检测牦牛肉的反应液A-1、检测鸡肉的反应液A-2、检测猪肉的反应液A-3、检测兔肉的反应液A-4或检测羊肉的反应液A-5，还包括能与该五组相互独立A型反应液分别反应的反应液B；各反应液的成分和配合比如下：

（1）检测牦牛肉的反应液A-1：每管23.000 μl的组成及配合比如下，

2.500 μl 的10×Lamp buffer、

1.000 μl 的Bst  DNA聚合酶8U/μl、

3.500 μl 的10mM dNTP、 

1.000 μl的20μM牦牛肉的内引物1：

GGTAACTTGTTCCGTTGATCAAATT-TTTT-TAAAGACTAGACCTACAAGTCA、

1.000 μl的20μM牦牛肉的内引物2：

TAGGGATAACAGCGCAATCCT-TTTT-ATGTCCTGATCCAACATCG、

0.125 μl的20μM牦牛肉的外引物1：AAAAAATCCTCCGAACGATT、

0.125 μl的20μM牦牛肉的内引物2：GATAGCGGTTGCACCATC、

0.500 μl的20μM牦牛肉的环引物1：GGATCAATGAGCGATAGAGTGATT、

0.500 μl的20μM牦牛肉的环引物2：TAAGAGTCCATATCGACAATAGGGT、

4.000 μl 的25mM MgCl₂ 、

4.000 μl 的5M甜菜碱、

余量为灭菌蒸馏水；

其中，10×Lamp buffer含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/ pH 8.8、 100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1%曲拉通X-100；

（2）检测鸡肉的反应液A-2：每管23.000 μl的组成及配合比如下，

2.500 μl 的10×Lamp buffer、

1.000 μl 的Bst  DNA聚合酶8U/μl、

3.500 μl 的10mM dNTP、 

1.000 μl的20μM鸡肉的内引物1：

TGCTCGTAGTTCTCAGGCGGAT-TTTT-CCCACTATGCCTAGCCCTA、

1.000 μl的20μM鸡肉的内引物2：

AACTCTAAGGACTTGGCGGTGC-TTTT-GGTGGTTGGGTGAATCGTG、

0.125 μl的20μM鸡肉的外引物1：AAAGCTAGGACCCAAACTGG、

0.125 μl的20μM鸡肉的内引物2：GGTATGTAGGCTGTGCTGG、

0.500 μl的20μM鸡肉的环引物1：TGTGTGATGGGAGGTATCTAGATT、

0.500 μl的20μM鸡肉的环引物2：CCCAAACCCACCTAGAGGAG、

4.000 μl 的25mM MgCl₂ 、

4.000 μl 的5M甜菜碱、

余量为灭菌蒸馏水；

其中，10×Lamp buffer含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/ pH 8.8、 100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1%曲拉通X-100；

（3）检测猪肉的反应液A-3：每管23.000 μl的组成及配合比如下，

2.500 μl 的10×Lamp buffer、

1.000 μl 的Bst  DNA聚合酶8U/μl、

3.500 μl 的10mM dNTP、 

1.000 μl的20μM猪肉的内引物1：

CAGGCTCCTCTAGGTGGATG-TTTT-TCGCAACTGCCTAAAACTC、

1.000 μl的20μM猪肉的内引物2：

TCGATAAACCCCGATAGACCTT-TTTT-TAGGGTTTGCTGAAGATGG、

0.125 μl的20μM猪肉的外引物1：CAAAACTATTCGCCAGAGTAC、

0.125 μl的20μM猪肉的内引物2：ATTGTGCTTACTATTGTTCCTT、

0.500 μl的20μM猪肉的环引物1：AGCACCGCCAAGTCCTTT、

0.500 μl的20μM猪肉的环引物2：CCAACCCTTGCCAATTCAGCCTAT、

4.000 μl 的25mM MgCl₂ 、

4.000 μl 的5M甜菜碱、

余量为灭菌蒸馏水；

其中，10×Lamp buffer含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/ pH 8.8、 100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1%曲拉通X-100；

（4）检测兔肉的反应液A-4：每管23.000 μl的组成及配合比如下，

2.500 μl 的10×Lamp buffer、

1.000 μl 的Bst  DNA聚合酶8U/μl、

3.500 μl 的10mM dNTP、 

1.000 μl的20μM兔肉的内引物1：

GGAAGGCTATGTCAGGAGCC-TTTT-TATAATTGGAGGCTTCGGGA、

1.000 μl的20μM兔肉的内引物2：

CATTCCTTCTTCTACTAGCCTCCT-TTTT-GGTGGATAAACAGTTCAGC、

0.125 μl的20μM兔肉的外引物1：ACATGCCTTTGTAATAATCTTCT、

0.125 μl的20μM兔肉的内引物2：GCATGTGCAAGATTACCG、

0.500 μl的20μM兔肉的环引物1：TGACCGAACAGGGGGACT、

0.500 μl的20μM兔肉的环引物2：AGTAGAAGCTGGGGCGGGGA、

4.000 μl 的25mM MgCl₂ 、

4.000 μl 的5M甜菜碱、

余量为灭菌蒸馏水；

其中，10×Lamp buffer含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/ pH 8.8、 100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1%曲拉通X-100；

（5）检测羊肉的反应液A-5：每管23.000 μl的组成及配合比如下，

2.500 μl 的10×Lamp buffer、

1.000 μl 的Bst  DNA聚合酶8U/μl、

3.500 μl 的10mM dNTP、 

1.000 μl的20μM羊肉的内引物1：

ATGTGGTTATAGCCCCTAGACATAA-TTTT-CCGGTTTTATCCACTAACAGAA、

1.000 μl的20μM羊肉的内引物2：

TATGCGCCCTCACCCAAAAT-TTTT-TTACTATTATGAGGCCGAGTT、

0.125 μl的20μM羊肉的外引物1：AGCAGGCATCTTCCTACT、

0.125 μl的20μM羊肉的内引物2：GGGGTTGATTAATTCCGATTG、

0.500 μl的20μM羊肉的环引物1：GTTATTTAAACCGGTTAG、

0.500 μl的20μM羊肉的环引物2：AATTATCGCTT TCTCTACATC CAGC、

4.000 μl 的25mM MgCl₂ 、

4.000 μl 的5M甜菜碱、

余量为灭菌蒸馏水；

其中，10×Lamp buffer含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/ pH 8.8、 100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1%曲拉通X-100；

（6）反应液B：1000×的荧光染料 SYBR Green Ⅰ。