[发明专利]用于冻存复苏后的细胞的保存液

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及一种用于冻存复苏后的用于临床回输的细胞的保存液。

背景技术

细胞治疗，又称活细胞治疗，包括活细胞修复损伤的组织。用于临床回输的细胞为多干细胞或免疫细胞。脐带含有大量上皮干细胞和间充质细胞。两种干细胞均具有巨大潜能帮助修复缺损的组织或器官，因此协助治疗各种疾病。上皮干细胞形成连接、支撑或覆盖身体某些结构和器官的软组织，这些结构和器官包括角膜，皮肤和肝脏；而间质干细胞则是结构性组织（如骨骼、软骨、肌肉、纤维性组织及脂肪等）的构成要素。

间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件控制下分化为神经细胞、成骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等，在细胞替代治疗及组织工程方面有极大的应用价值。目前，间充质干细胞MSC(Mesenchymal stem cells,MSC)主要来源于骨髓，但由于骨髓源性MSC存在高度病毒污染的可能，且随着年龄增长其细胞数量和扩增、分化能力出现明显下降趋势，故寻找一种能替代骨髓并可弥补其缺陷的间充质干细胞来源，已越来越受到各国学者的关注。脐带间充质干细胞作为一种多潜能干细胞，成功避开了胚胎干细胞来源缺乏、异体排斥、道德伦理等诸多限制，成为干细胞领域的研究热点。

脐带MSC目前已可稳定地在体外分离，且扩增迅速，由于其具有低免疫原性、支持造血及多向分化潜能的特点，它在多项医学组织工程方面具有广泛的临床应用前景。

人脐带间充质干细胞是组织工程理想的种子细胞。因为其除具有取材方便，来源广，数量充足，增殖能力强，长期传代不改变，分泌具有合适构成的细胞外基质等特点。此外还具有以下优点：1、采集脐带对产妇和新生儿没有任何危害及损伤；2、干/祖细胞更原始，有更强的增殖分化能力；3、免疫细胞较为幼稚，功能活性低，免疫功能不够成熟，处于一种缄默状态，不会触发免疫反应及引起移植物抗宿主病；4、不会有肿瘤细胞，病毒和病原微生物的感染及传播几率也相对较低；5、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。

人脐带间充质干细胞不仅具有多向分化潜能，还易于外源基因的转染和表达，且MSC所携带的外源基因表达具有明显的组织特异性，因此人脐带MSCs有可能成为一种新型的基因治疗的靶细胞。通过转基因的方法，可以将利于定向分化的生长因子基因转入间充质干细胞，促进定向分化，加快体内组织修复的进程。

但是，冻存复苏后的细胞，细胞膜较为脆弱，此时若选用常规的临床回输试剂生理盐水作为细胞的回输保存液，细胞在长时间运输时，细胞容易坏死而使活性降低。因此，尚需提供一种细胞的保存液，以保证冻存复苏后的细胞在运输途中保持其生物活性，可以更好的获得高活性的细胞。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种新型的冻存复苏后的细胞保存液及其用途，以及包含该保存液和脐带干细胞的脐带干细胞混合物。

本发明的第一方面，提供一种细胞保存液，包括以下组分：生理盐水、KCl和MgSO₄。

在另一优选例中，所述KCl的浓度为0.3-0.4g/l，MgSO₄的浓度为0.02-0.1g/l。

在另一优选例中，所述KCl的浓度为0.32-0.36g/l，MgSO₄的浓度为0.04-0.06g/l。

本发明的第二方面，提供第一方面所述的细胞保存液的用途，所述用途选自下组：

(a)用于保存干细胞；

(b)用于建立干细胞库；

(c)用于保持干细胞的活力

在另一优选例中，所述干细胞为冻存复苏后的细胞。

在另一优选例中，所述干细胞为脐带干细胞。

在另一优选例中，所述干细胞为冻存复苏后的脐带干细胞。

在另一优选例中，所述保存是指在2~6℃进行保存。

在另一优选例中，所述保存是指在3.5-4.5℃进行保存。

本发明的第三方面，提供一种脐带干细胞混合物，所述混合物包括以下组分：

脐带干细胞，和

第一方面所述的细胞保存液。

本发明的第四方面，提供一种脐带干细胞库，其特征在于，所述细胞库含有第三方面所述的脐带干细胞混合物。

采用本发明的保存液可以长时间保存冻存复苏后的细胞，细胞活力较传统的生理盐水保存要高，更符合临床回输要求。