[发明专利]一种短肽、载铜纳米生物材料及在制备治疗下肢缺血性疾病的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物材料领域，特别涉及自组装短肽、含自组装短肽的载铜纳米生物材料及其在制备治疗下肢缺血性疾病的药物中的应用。

背景技术

自组装短肽是一种新型的纳米生物材料，自20世纪90年代问世以来，受到了人们的广泛重视，得到了快速的发展，并在细胞三维培养及制备疏水药物载体、止血药物、烧伤治疗药物、抑菌药物、白血病治疗或预防药物等方面应用。但是，制备出更多的自组装短肽、扩大自组装短肽的应用范围仍然是科技工作者关注的问题。

下肢缺血性疾病是一种世界范围内常见的下肢动脉慢性狭窄或闭塞导致的外周血管病，下肢缺血性疾病主要包括下肢动脉硬化闭塞症(ASO)、血栓闭塞性脉管炎(TAO)和糖尿病动脉硬化闭塞症(DAO)。下肢缺血性疾病往往由于病侧主要动脉严重闭塞，造成远端供血障碍，其最终结局往往是截肢甚至死亡。下肢缺血性疾病发病率都在逐年急速上升。据统计，在西方国家最新的重度下肢缺血(Critical limb ischemia, CLI)的发病率为500-1000/百万人/年，在美国每年病例数量为150000-300000。CLI第一年的死亡率和发病率超过了恶性肿瘤，死亡率为25%，截肢率为30%。在我国，现有下肢缺血病人2000万以上，年增长高达60万。近年来，随着引起血管疾病危险因素的增多，如高血脂、高血压、糖尿病等疾病发病人数的急速增加以及老龄化时代的到来，下肢缺血性疾病已逐渐凸显出严重的危害程度和发病率逐年增高的趋势，面对如此严峻形势，如何减少患者的致残率、挽救已濒于截肢的病人肢体，是医疗领域急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种自组装短肽和含自组装短肽的载铜纳米生物材料，本发明的再一目的是证明载铜纳米生物材料能使病变组织器官的血管新生，以便开发出一类治疗下肢缺血性疾病的新型药物。

本发明所述自组装短肽，命名为RP，其氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所述，其理论分子量为3066.15道尔顿。本发明所述载铜纳米生物材料，为上述RP自组装短肽、RAD16-II自组装短肽、CuSO₄和灭菌去离子水配制成的混合溶液所形成的凝胶状物质，所述混合溶液中，RP自组装短肽的浓度为0.1mM～4mM，RAD16-II自组装短肽的浓度为2mM～~8mM、CuSO₄的浓度为10μM～100μM，所述RAD16-II自组装短肽已公开 [见Shuguang Zhang. Designer self-assembling peptide nanofiber scaffolds for 3D tissue cell cultures. Seminars in Cancer Biology 15 (2005) 413–420] ，其氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO：2所述。本发明所述载铜纳米生物材料，其制备方法如下：

（1）去离子水的灭菌处理

将去离子水在蒸汽压103.4kPa、温度121.3℃下处理至少30分钟，然后冷却至室温；

（2）原料溶液的配制

在室温、常压下将CuSO₄用步骤（1）灭菌处理的去离子水配制成CuSO₄溶液，然后在超净台的无菌环境中将CuSO₄溶液用0.22μm的一次性滤器过滤除菌，所述CuSO₄溶液中，CuSO₄的浓度是上述形成凝胶状物质的混合液中的CuSO₄浓度的2倍~4倍；

在超净台的无菌环境中于室温、常压下将RP自组装短肽用步骤（1）灭菌处理的去离子水配制成RP自组装短肽溶液，所述RP自组装短肽的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所述，所述RP自组装短肽溶液中，RP自组装短肽的浓度是上述形成凝胶状物质的混合液中的RP自组装短肽浓度的2倍~4倍；

在超净台的无菌环境中于室温、常压下将RAD16-II自组装短肽用步骤（1）灭菌处理的去离子水配制成RAD16-II自组装短肽溶液，所述RAD16-II自组装短肽的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO：2所述，所述RAD16-II自组装短肽溶液中，RAD16-II自组装短肽的浓度是上述形成凝胶状物质的混合液中的RAD16-II自组装短肽浓度的2倍~4倍；

（3）混合液的配制