[发明专利]电喷雾萃取电离串联质谱快速检测尿中1-OHP的方法

说明书

技术领域

本发明涉及尿中1羟基芘（1-OHP）的检测方法，特别涉及一种电喷雾萃取电离串联质谱快速检测尿中1-OHP的方法，属于多环芳烃生物标志物的分析检测手段。

背景技术

尿中1-OHP是致癌性环境污染物多环芳烃（PAHs）的重要生物标志物，在人体对PAHs暴露及健康风险评价研究（如PAHs分子流行病学）中意义重大。

目前文献报道的尿中1-OHP的分析方法包括：高效液相色谱荧光光谱法（high performance liquid chromatography fluorescence detection，HPLC-FD）、RTF、SFS、共振光散射法（resonance light scattering spectroscopy，RLS）、气相色谱（氢火焰离子化检测器）（gas chromatography flame ionization detection，GC-FID）、气相色谱质谱法（gas chromatography mass spectrometry，GC-MS）、液相色谱质谱法（liquid chromatography mass spectrometry，LC-MS）、毛细管电泳（紫外检测器）（capillary electrophoresis）、化学发光法（chemiluminescence）、电化学法（electrochemistry）、光谱电化学法（spectroelectrochemical sensing）、免疫学法（immunologic methods）、放射免疫学法（radioimmunoassay）、免疫化学法（immunochemical assay）等。

在上述方法中，尽管上述分析检测技术均能实现OH-PAHs的定性定量分析，且灵敏度、准确度等结果互可比拟。但是考虑到操作简易程度、仪器设备可获取性、技术成熟度等因素，HPLC是目前最常用的检测技术。另一方面，基于MS检测技术的LC-MS（包括LC-MS/MS）和GC-MS（包括GC-MS/MS），由于MS检测结果可以提供分子结构信息，因此在方法特异性上具有其它检测技术不可比拟的优势。此外，因为GC-MS和LC-MS已在实验室较为普及，因此也是目前常用的OH-PAHs检测手段。

然而，现有尿中1-OHP分析方法普遍存在样品前处理和色谱环节耗时较长，无法满足PAHs健康风险评价（如PAHs分子流行病学）中高通量样品分析的迫切需求。

发明内容

本发明的目的在于避免现有尿中1-OHP检测方法前处理过程繁琐、分析周期较长而提供一种电喷雾萃取电离串联质谱快速检测尿中1-OHP的方法。本发明可实现尿中1-OHP的快速定量，能够满足PAHs健康风险评价（如PAHs分子流行病学）中高通量样品分析的迫切需求。

本发明所述的检测方法是借助电喷雾萃取电离（EESI）源和商品化仪器LTQ-XL型线性离子阱质谱仪，进行无样品前处理条件下、尿中1-OHP的快速检测。 

本发明是通过如下技术方案实现的：

（1）1-OHP母液的配制：准确称取10.0 ± 0.5 mg 1-OHP，置入大瓶中，加入甲醇溶解，得到浓度为100 ± 5mg L^–1的1-OHP母液。将母液转移至棕色小瓶中，4 ± 0.2 ^oC密封避光保存。

（2）1-OHP标液的配制：移取有效体积1-OHP母液，用甲醇稀释为浓度20 ± 1μg L^–1的1-OHP标液，将标液转移至棕色小瓶中，4 ± 0.2 ^oC密封避光保存。

（3）加标尿样的准备：取有效体积1-OHP母液（100 mg L^–1），用尿样逐级稀释，得到1-OHP加标浓度为0.01–5 mg L^–1的加标尿样。加标后尿中1-OHP浓度约为未加标前尿（水解尿样）1-OHP浓度的1.5–3.0倍最佳。

加标尿样是为EESI-MS定量测定尿中1-OHP时所用的标准加入法所备。配制加标尿样所用的尿样为水解后的尿样。采用水解尿样的原因是，尿中排出的1-OHP主要是结合态1-OHP（如1-OHP和葡糖苷酸的结合物），需水解尿样后，才可得到游离态1-OHP，进行检测。