[发明专利]结核杆菌重要抗原的高通量筛选及其在结核病诊断中的应用

权利要求书

1.一种结核杆菌阳性抗原，其特征在于，所述抗原选自：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO:1-46所示的多肽：

(b)将SEQ ID NO:1-46氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；

(c)与SEQ ID NO：1-46所示氨基酸序列的同源性≥90%（较佳地≥95%，更佳地≥98%，最佳地≥99%）的、具有免疫原性的多肽；或

(d)多肽(a)－多肽(c)的具有免疫原性的活性片段。

2.权利要求1所述阳性抗原的用途，其特征在于，它被用于制备检测结核杆菌的试剂或试剂盒。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸选自下组：

(a)编码权利要求1所述阳性抗原的多核苷酸；或

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

4.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求3所述的多核苷酸。

5.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求4所述的载体，或其染色体整合有权利要求3所述的多核苷酸。

6.一种制备结核杆菌阳性抗原的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在适合表达的条件下，培养权利要求5所述的宿主细胞；和

(b)从培养物中分离出所述的结核杆菌阳性抗原。

7.一种检测结核杆菌的试剂盒，其特征在于，包括组分：

组分(i)：一容器或载体；以及

组分(ii)：位于所述容器内或载体上的权利要求1所述的阳性抗原。

8.一种检测结核杆菌的试剂，其特征在于，所述试剂包括：固相载体以及包被于所述固相载体上的如权利要求1所述阳性抗原。

9.一种与权利要求1所述的结核杆菌阳性抗原特异性结合的抗体。

10.一种抗原-抗体复合物，其特征在于，所述的复合物包括：

(i)氨基酸序列如SEQ ID NO:1-46所示（较佳地氨基酸序列如SEQ ID NO:1-5所示，更佳地，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示）的阳性抗原；以及

(ii)与(i)中的阳性抗原特异性结合的抗体；

所述的抗原和抗体结合在一起。

11.权利要求10所述的抗原-抗体复合物的用途，其特征在于，它被用于：

(a)制备检测结核杆菌的试剂或试剂盒；和

(b)用作检测结核杆菌的阳性对照。

12.一种高通量筛选结核杆菌抗原的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)将含有信号肽或跨膜区的候选蛋白抗原与标志蛋白GST进行融合表达；

(2)将步骤(1)得到的融合蛋白置于螯合了GSH的多孔板的孔中，从而捕获GST融合蛋白；

(3)将含有结核杆菌抗体的血清置于步骤(2)的多孔板的孔中；和

(4)筛选形成特异性抗原-抗体复合物的孔，所对应的候选蛋白即为结核杆菌阳性抗原。

13.一种检测样本中是否感染结核杆菌的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)将权利要求1所述的结核杆菌阳性抗原与待检测的样本接触；和

(2)检测样本中是否含有与权利要求1任一所述的阳性抗原结合的特异性抗体。