[发明专利]一种卵巢早衰非人哺乳动物模型的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物模型领域。更具体地说，本发明涉及性成熟前卵巢早衰动物模型的制备以及它们在卵巢早衰药物开发中的应用。

背景技术

FSH是一种异二聚体糖蛋白，由腺垂体合成分泌，直接参与调控卵巢功能，包括卵泡发育与性激素的合成分泌，其调节作用通过卵泡颗粒细胞上FSH受体(FSHR)信号转导途径介导[1]。FSHR是一种典型的G蛋白偶联受体，与FSH结合后，通过G蛋白介导的腺苷环化酶-环磷酸腺苷(cAMP)信号级联反应，促进颗粒细胞中芳香化酶的合成，进而促进雌激素的合成分泌。人FSHR是由695个氨基酸(大鼠692个氨基酸)组成的一条肽链，其氨基末端17个氨基酸为疏水性信号肽，紧接着是由349个氨基酸(大鼠348个氨基酸)组成的胞外区，是识别结合FSH的区域；然后是由264个氨基酸组成的含有7个跨膜螺旋结构的跨膜区；最后是由羧基末端65个氨基酸(大鼠63个氨基酸)组成的胞内区，为信息传递所必需[2、3]。在卵泡发育过程中，颗粒细胞膜上的FSHR数量保持相对的恒定，如果FSHR功能被抑制，卵泡因发育障碍而发生异常闭锁，从而导致卵巢功能的减退。

卵巢早衰(POF)[4]的主要临床特征之一是患者血液中FSH水平的异常升高，提示POF患者卵巢组织对FSH的敏感性降低或消失。已有基于人群的研究证实，FSHR基因突变会导致遗传性卵巢早衰[5]。现有技术中仅仅研究了在实验动物体内诱导FSHR抗体对雄性小鼠生育力的影响以及遗传修饰的POF小鼠模型[6、7]。

因此，本领域急需能够用于研究POF且简便易得的哺乳动物模型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种雌性非人哺乳动物模型以及所述模型在性成熟前卵巢早衰的治疗和特异治疗药物的筛选中的应用。

在第一方面，本发明提供卵巢早衰的非人哺乳动物模型的制备方法，该方法利用衍生自FSHR的免疫原，免疫非人雌性哺乳动物得到所述卵巢早衰的非人哺乳动物模型。

在优选的实施方式中，所述衍生自FSHR的免疫原包括选自下组的多肽：

(a)序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的多肽；

(b)包含(a)所限定的序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且具有(a)所限定的多肽功能的由(a)衍生的多肽。

在优选的实施方式中，所述多肽包含(a)所限定的序列经过1-3个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且具有(a)所限定的多肽功能。

在优选的实施方式中，所述非人哺乳动物是啮齿类动物或灵长类动物；在另一优选的实施方式中，所述非人哺乳动物是小鼠、大鼠、豚鼠、家兔或猴，优选大鼠。

在优选的实施方式中，所述免疫通过口服、含服、喷雾、经鼻腔、经皮等方式实施。

在优选的实施方式中，所述免疫进行一次或多次；优选进行三次。

在优选的实施方式中，与正常的非人哺乳动物相比，所述非人哺乳动物模型血液中的雌二醇水平有统计学显著的降低和/或FSH水平有统计学显著的升高和/或所述非人哺乳动物模型的后代窝仔数有统计学显著的降低。

在优选的实施方式中，所述雌二醇水平有统计学显著的降低是指与正常非人哺乳动物相比，所述非人哺乳动物模型血液中的雌二醇水平降低50%以上，优选50-90%，更优选70-80%。

在优选的实施方式中，所述FSH水平有统计学显著的升高是指与正常非人哺乳动物相比，所述非人哺乳动物模型血液中的FSH水平升高20%以上，优选20%-50%，更优选30-40%。

在优选的实施方式中，所述后代窝仔数有统计学显著的降低是指与正常非人哺乳动物相比，所述非人哺乳动物模型的窝仔数降低50%以上，优选50-90%，更优选70-80%。

在第二方面，本发明提供第一方面所述方法制备的卵巢早衰非人哺乳动物模型在筛选卵巢早衰治疗药物中的应用。

在第三方面，本发明提供筛选卵巢早衰治疗药物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将待测物质给予第一方面所述方法制备的卵巢早衰非人哺乳动物模型；和

(b)检测所述动物模型中的雌二醇或FSH水平；

如果与给予待测物质前的对照动物模型相比，给予待测物质的非人哺乳动物模型中所述雌二醇有统计学显著的升高和/或FSH浓度有统计学显著的降低，则待测物质是卵巢早衰治疗药物。

在优选的实施方式中，所述给予方法是口服、含服、喷雾或经皮给药。