[发明专利]一种乳制品中全氟化合物的免疫亲合色谱-超高效液相色谱-质谱连用快速检测方法

权利要求书

1.一种乳制品中全氟化合物的免疫亲合色谱-超高效液相色谱-质谱连用快速检测方法，其特征在于，制备免疫亲合色谱的抗体，实现色谱前处理中PFCs及其衍生物全氟辛烷磺酸盐和全氟辛基磺酰氟的富集浓缩；运用液相色谱-质谱连用对乳制品PFCs进行定性定量分析并建立典型PFCs及其衍生物全氟辛烷磺酸盐和全氟辛基磺酰氟的标准曲线，提供最佳分离鉴定效果。

2.根据权利要求1所述的免疫亲合色谱-超高效液相色谱-质谱连用快速检测方法，其特征在于，制备了适用于PFCs及其衍生物的免疫亲合色谱柱。

3.根据权利要求2所述的PFCs及其衍生物的免疫亲合色谱柱，其特征在于，色谱柱制备的具体步骤包括：人工抗原的合成、多克隆抗体的筛选与鉴定以及IAC柱的研制。

4.根据权利要求3所述的人工抗原的合成，具体包括：a、PFOS/PFOA等PFCs及其结构类似物二羧基或二磺酸基PFCs，通过混合酸酐法与载体蛋白牛血清蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)偶联合成人工抗原；b、人工抗原的纯化及鉴定：采用透析的方式进行纯化；通过HPLC、MS、SDS-PAGE凝胶电泳、IR等鉴定手段对所合成的人工抗原进行鉴定，判定偶联效果，计算结合比。

5.根据权利要求3所述的多克隆抗体的筛选，具体为：将合成的PFCs-BSA人工抗原注入大白兔，约间隔7-10天注射一次，30天后，取血清进行抗体的特性鉴定。抗体特性及效价采用包被PFCs-OVA的间接竞争ELISA方法，利用酶标羊抗兔抗体进行测定。对于阳性高效价的抗体血清进行收集，并经聚丙烯凝胶电泳或琼脂双扩进行抗体纯化。纯化后抗体效价、特异性测定采用ELISA进行测定。

6.根据权利要求3所述的IAC柱的研制，具体为：将抗体与活化的SepharoseCL-4B偶联，乙醇胺封闭未偶联的活性位点，获得特异性免疫吸附剂。将免疫吸附剂装柱，平衡，然后进行柱容量、选择性、富集效率、稳定性测试，洗脱条件的建立，回收率、重复性测定等。

7.根据权利要求1所述的运用液相色谱-质谱连用对乳制品PFCs进行定性定量分析，其特征在于，乳制品的前处理方式为：将样品过滤纸取200mL，利用固相萃取仪进行净化分离萃取，收集洗脱液，将洗脱液氮吹至干，7∶3甲醇水定容1mL，涡旋振荡后用高速冷冻离心机离心，供上机测定。

8.根据权利要求1所述的运用液相色谱-质谱连用对乳制品PFCs进行定性定量分析，其特征在于，高效液相色谱分析方法具体为：

色谱柱：Eclipse Plus C18 2.1*50mm

流动相：①A：5mmol/L乙酸铵5％甲醇水溶液；②流动相B：100％甲醇

梯度洗脱程序：

柱温：45℃

进样量：10μL

串联质谱条件具体为：

离子源：ESI，离子化方式ES(-)。

毛细管电压：2.5kV。

离子源温度：120℃。

脱气溶剂温度：350℃。

碰撞气流速：0.35mL/min。

扫描模式：多反应(MRM)。

碰撞能量、锥孔电压：

9.根据权利要求1所述的超高效液相色谱串联质谱仪分析方法，其特征在于，固相萃取法的加标量为0.4～12.0ng时，平均加标回收率范围为81.0％～133.5％之间，相对标准偏差在1.4％～7.9％之间。

10.根据权利要求1所述的超高效液相色谱串联质谱仪分析方法，其特征在于，所测定的十种全氟化合物最低检出限为0.014～0.076pg/ml。