[发明专利]具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物的制备方法及应用，具体涉及一种具有增强免疫活性、抗病毒活性的生物饲料添加剂川明参多糖硫酸酯化物及其制备方法及应用。

背景技术

药物饲料添加剂由于其具有促进畜禽生长和预防疾病等作用，提高了生产率和饲养经济效益，在我国畜禽养殖业中起着重要作用。然而，随着药物饲料添加剂的长期使用，尤其是抗生素、化学合成药物在饲料中的滥用，出现了耐药性、药物残留、环境污染等问题。这不仅降低了畜产品的质量，还会通过生物链影响到人类健康和生态平衡。随着我国加入WTO后国际市场化的步伐加快，以及人们对生活质量要求的提高，发展无公害畜牧业，生产绿色畜产品已成为我国政府畜牧主管部门的首要任务，寻找绿色、安全、高效的饲料添加剂替代抗生素、化学药物等的无公害绿色饲料添加剂成为加快我国畜禽业可持续发展的当务之急。

中药多糖是中药的主要活性成分之一，其生物活性近年来受到广泛关注，研究表明其既具有资源丰富，安全低毒，无污染，无残留等优点，又具有抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病、抗病毒、抗辐射、调节免疫、调血脂等功能。然而植物多糖自身不具有某些生物活性或生物活性很弱，因而限制了其应用。如何利用现有的科学技术手段改造多糖以提高其生物活性已成为一个重要问题。

发明内容

鉴于植物多糖的上述不足，本发明通过大量的研究和实践，提供一种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物的制备方法及应用。

为了提高植物多糖的生物活性，本发明采用了以下技术方案：

一种具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物的制备方法，提取和精制中药川明参中多糖，然后在川明参多糖中添加酯化试剂制备成川明参多糖硫酸酯化物。所述川明参多糖的制备方法如下：川明参干燥粉末置于索式提取器中，用1∶1(V/V)的乙醇、乙醚混合液加热回流脱脂2～6h，过滤后药渣置于室温下干燥。将蒸馏水按料液比1∶10～20(g/ml)加入药渣中，80～100℃提取3次，每次1～3h，合并提取液，浓缩至最小体积，用流水透析24～48h后蒸馏水透析12～24h，透析袋内加入体积为提取液1/5的三氯甲烷，随后再加入体积为三氯甲烷1/5的正丁醇，剧烈振摇10～20min，离心去除水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白3～5次。浓缩后加入1～3倍量95％乙醇(V/V)静置过夜。离心收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤后，离心分离，沉淀物置于30～40℃真空干燥得川明参多糖。所述川明参多糖硫酸酯化物的制备方法如下：

(1)酯化试剂的制备：将氯磺酸与吡啶按按照1∶6～1∶10的体积比，在冰盐浴以及不断搅拌下，逐滴加入到预冷的50mL无水吡啶中，其中氯磺酸应在20～30min内滴加完毕；

(2)均匀分布于无水甲酰胺的川明参多糖的制备：将100～300mg川明参多糖边搅拌边加入到10～20mL无水甲酰胺中，继续搅拌20～30min使川明参多糖在无水甲酰胺中均匀分布；

(3)将酯化试剂加入到含有川明参多糖的无水甲酰胺溶液中，在40～60℃水浴温度下搅拌反应1～2h。反应完毕后，冷却至室温，再加入15％NaOH溶液调pH值至7.0～8.0，流水透析48～72h后蒸馏水透析12～24h。乙醇沉淀，丙酮、无水乙醚分别洗涤，真空干燥12～24h后得到川明参多糖硫酸酯化物。

所述的具有免疫增强活性和抗病毒功效的植物多糖硫酸酯化物的应用，作为一种抗病、促生长和无残留的生物饲料添加剂用于畜禽。

本发明中的多糖硫酸酯化物主要通过氯化钡—明胶法测定其硫酸取代度。本发明经药效学研究表明，川明参多糖硫酸酯化物具有增强免疫活性和抗病毒活性。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

实施例1

川明参多糖的制备：称取300g的川明参干燥粉末置于索式提取器中，用1∶1(V/V)的乙醇、乙醚混合液加热回流脱脂6h，过滤后药渣置于室温下干燥。将蒸馏水按料液比1∶20(g/ml)加入药渣中，100℃提取3次，每次3h，合并提取液，浓缩至小体积，用流水透析48h后蒸馏水透析24h，透析袋内液体积为提取液1/5的三氯甲烷，随后再加入体积为三氯甲烷1/5的正丁醇，剧烈振摇20min，离心除去水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白5次。浓缩后加入3倍量95％乙醇(V/V)静置过夜。离心收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤后，离心分离，沉淀物置于40℃真空干燥得川明参多糖。