[发明专利]结合EGFR家族蛋白的嵌合抗原受体、其组合物及用途

说明书

本发明属于分子生物学和免疫学领域，涉及一种结合EGFR家族蛋白的嵌合抗原受体、其组合物及用途。具体地，本发明涉及一种嵌合抗原受体，包含高效结合EGFR家族蛋白的多肽以及跨膜区，其中，所述高效结合EGFR家族蛋白的多肽包含HERIN。本发明在维持T细胞杀伤特异性的前提下，提高了T细胞的增殖能力与杀伤作用。

技术领域

本发明属于分子生物学和免疫学领域，涉及一种结合EGFR家族蛋白的嵌合抗原受体、其组合物及用途。

背景技术

肿瘤过继细胞治疗（adoptive cell therapy,ACT）是将经处理的自体或异体免疫细胞（主要是自体细胞）回输给肿瘤患者，以增强患者免疫功能，达到治疗目的的方法。当前肿瘤ACT进展迅速，利用肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocyte,TIL）开展的过继免疫治疗方案针对黑色素瘤取得了非常好的临床效果（Science2002;298:850-4）。然而，T细胞活化需要两个信号的刺激，即两种T细胞活化相关信号。其中，T细胞表面TCR-CD3复合体与抗原肽-MHC分子结合，提供T细胞活化的第一信号，决定T细胞的杀伤特异性；T细胞表面的共刺激分子（如CD28）与相应配体（如B7）结合，提供T细胞活化的第二信号，促进T细胞活化、增殖与存活。但肿瘤细胞第一信号刺激源（如MHC分子）与第二信号配体（如B7）等缺乏或表达下降，无法有效提供T细胞活化相关的信号，从而激活T细胞免疫反应。因而，需要对T细胞进行基因改造。目前主要通过转基因TCR（T cell receptor）及嵌合抗原受体（chimeric antigen receptors,CAR）两种方式来实现这种T细胞的基因改造（Blood 2010;116:1035-44；Nat Rev Clin Oncol 2011;8:577-85）。

TCR改造具有比较大的限制性，①转基因TCR链可能与病人的内源性的TCR链发生错配，从而导致T细胞表面肿瘤反应性的TCR密度减少；②TCR识别MHC分子递呈的抗原，但不同的病人MHC分子是不同的，所以必须分离对所有MHC单体型特异的TCR，可操作性低；③大部分TCR不能识别糖类或糖脂类抗原，抗原选择范围较窄；④只提供T细胞活化相关的第一信号，没有提供第二信号，疗效不足。因而，嵌合抗原受体CAR受体受到更多的青睐。

嵌合抗原受体（CAR）由一个scFv单链抗体（由抗体VL区氨基酸序列和VH区氨基酸序列经Linker连接而成），通过铰链结构与源于TCR复合体或者IgE高亲和受体的跨膜和胞内信号结构连接构成。表达CAR的T细胞可通过非MHC限制性途径与抗原反应。此外，与常规的TCR只能针对的蛋白抗原相比，CAR并不局限于蛋白抗原，还包括糖类和糖脂类TAA，而这些抗原不像蛋白抗原那么容易突变（Curr Opin Immunol 2009;21:215-23；Blood 2010;116:1035-44；Cancer Res2011;71:3175-81；J Cancer 2011;2:378-82）。

自1989年，由Eshhar和其同事首次提出CAR的概念以来，其已经历了三个不同的发展阶段。

第一代CAR，包含胞外特异识别肿瘤抗原的scFv片段，胞内激活信号由CD3ζ或FcεRIγ的ITAM（immunoreceptor tyros ine-based activation motifs）信号链来传递。但是第一代CAR受体缺乏T细胞的共刺激信号，导致T细胞只能发挥瞬间效应，在体内存在时间短、细胞因子分泌少。