[发明专利]一种止血剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种止血材料相关技术领域，具体涉及一种止血剂及其制备方法和应用。

背景技术

现有技术中明胶已经被广泛用于止血，如强生医疗器材有限公司的Surgiflo?流体明胶，壳聚糖明胶（中国专利申请号：200310121182.X），改性明胶（中国专利申请号：200910244834.6）以及其它用于止血的明胶，如中国专利02121201.5，98117763.8，03126852.8，02104346.9，01142070.7等；美国专利6,652,840，,413,713，6,238,688，6,194,138 5,645,849，4,596,788，4,539,204等。明胶具有止血效果，可以用于外伤或者手术止血。

微生物谷氨酰胺转胺酶（microbial transglutaminase，缩写MTG）与凝血因子FACTOR XIII属于同一个家族的酶，很多研究表明了其在凝血反应中的作用。利用MTG可以交联明胶，形成良好的多空物或者网状物，例如，它可以交联I型胶原蛋白形成抗高温的胶（Nomura Y, Toki S, Ishii Y, Shirai K. Biosci Biotechnol Biochem. 2001 Apr;65(4):982-5）；MTG与明胶作用形成的胶不会受热溶解（Chen T, Embree HD, Brown EM, Taylor MM, Payne GF.，Biomaterials. 2003 Aug;24(17):2831-41，美国专利：5,834,232）并可用于细胞固定（Chen T, Small DA, McDermott MK, Bentley WE, Payne GF.，Biomacromolecules. 2003 Nov-Dec;4(6):1558-63），生物支架（Broderick EP, O'Halloran DM, Rochev YA, Griffin M, Collighan RJ, Pandit AS. J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2005 Jan 15;72(1):37-42.；Chen RN, Ho HO, Sheu MT. Biomaterials. 2005 Jul;26(20):4229-35）。用MTG增强明胶的交联，以提高其强度和黏性，用于制作止血材料、止血敷料或止血用密封材料（McDermott MK, Chen T, Williams CM, Markley KM, Payne GF. Biomacromolecules. 2004 Jul-Aug;5(4):1270-9；中国专利：200980131973.6和200780051215.4；美国专利：8,133,484；欧洲专利：WO2012017415、WO2011132153、BRPI0718328、ZA200904470、EP2303344、EP2303341及CN102124058）。现有技术所采用的MTG是指将谷氨酰胺酶原（pro-MTG）切除前肽后所获得的成熟的酶。在通常保存条件下MTG较易失活而不稳定，对温度比较敏感，不稳定，且必须在较高纯度条件下才能发挥交联作用。

MTG是成熟的酶，是谷氨酰胺酶原（pro-MTG）被切除前肽后所获得的（Ralf PASTERNACK, Simone DORSCH, Jens T. OTTERBACH, Isabella R. ROBENEK, Sabine WOLF and Hans-Lothar FUCHSBAUER，Eur. J. Biochem. 257, 5702576 (1998)）。在生物体内发生，能将酶原切割出活性MTG分子的蛋白酶有Streptomyces albogriseolus来源的SAM-P20、SAM-P26、SAMP45和SAP以及Streptomyces mobaraensis来源的内源性TG激活酶TAP和Streptomyces hygroscopicus中的丝氨酸蛋白酶等（Taguchi S, Arakawa K, Yokoyama K, et al. J Biosci Bioeng, 2002,94(5):478-81. Zhang D, Wang M, Wu J, et al. J Agric Food Chem, 2008,56(21):10261-4.）。但上述反应不能被用于成熟MTG的工业应用。