[发明专利]细菌过滤杯及其在生防细菌代谢物抑菌活性检测中的应用

权利要求书

1.一种细菌过滤杯，其特征在于：包括筒形杯体，所述筒形杯体的杯底开设有一圆孔，所述圆孔上设有一层过滤网，所述过滤网上设有一水琼脂层，所述水琼脂层的上表面设有用于放置生防细菌发酵液的凹槽，所述杯底外周壁上设有支撑脚。

2.根据权利要求1所述的细菌过滤杯，其特征在于：所述筒形杯体为不锈钢筒形杯体，所述过滤网为不锈钢过滤网。

3.根据权利要求1所述的细菌过滤杯，其特征在于：所述筒形杯体的支撑脚高度为3mm，过滤网的孔径为1mm。

4.根据权利要求1所述的细菌过滤杯，其特征在于：所述凹槽深度为3~4mm，凹槽底部与过滤网之间的水琼脂厚度为3~4mm。

5.一种细菌过滤杯的制备方法及其在生防细菌代谢物抑菌活性检测中的应用，其特征在于：按以下步骤进行操作：

（1）取一灭菌的大玻璃平皿，在其内制作1.8%水琼脂平板，其中水琼脂平板的厚度为3mm；

（2）取一底部带有过滤网的筒形不锈钢杯体，所述筒形不锈钢杯体的底部设有一圈高度为3mm的支撑脚，将筒形不锈钢杯体放在步骤（1）的水琼脂平板上，稍压使杯底的支撑脚接触大玻璃平皿的皿底，其中大玻璃平皿的直径大于筒形不锈钢杯体的直径；

（3）在步骤（2）的筒形不锈钢杯体内注入温度为50~60℃的水琼脂，使得杯中水琼脂的高度为6~7mm，然后立即放入一灭菌的小玻璃平皿，使其漂浮在水琼脂中间，待水琼脂凝固后，取出小玻璃平皿，使筒形不锈钢杯体内形成一个深度为3~4mm的水琼脂凹槽，其中筒形不锈钢杯体的直径大于小玻璃平皿的直径；

（4）将步骤（1）中的水琼脂平板移除，并用无菌刀片刮除粘附在过滤网底部的水琼脂，细菌过滤杯即制作完成；

（5）另取一灭菌的小玻璃平皿，在其内制作PSA培养基平板，其中PSA培养基平板的厚度为2~3mm；

（6）另取一灭菌的大玻璃平皿，将灭菌的小玻璃平皿的皿盖放入大玻璃平皿中；

（7）用灭菌的培养基打孔器在步骤（5）所述的PSA培养基中打孔，取出一片PSA培养基圆片，并将PSA培养基圆片移置在步骤（6）的小玻璃平皿的皿盖上；

（8）将步骤（1）~（4）中制好的细菌过滤杯放在步骤（7）的PSA培养基圆片上方，并使细菌过滤杯底部的过滤网与PSA培养基圆片直接接触；

（9）在步骤（8）所述的细菌过滤杯内的水琼脂凹槽中用移液枪注入待测的细菌发酵液，在超净工作台上或在无菌条件下静置15h以上，使杯中的细菌发酵液的代谢物经水琼脂滤除菌体后，充分而自然地渗透到PSA培养基圆片中，多余的无菌体发酵液可沿着小玻璃平皿皿盖的外沿流入大玻璃平皿内；

（10）将细菌过滤杯移除，将被无菌体的发酵液及其代谢物渗透的PSA培养基圆片移至与一无菌的玻璃平皿内；

（11）在步骤（10）所述的PSA培养基圆片中接入指示病原菌菌丝块，于28℃的黑暗环境中培养72h，测量指示病原菌菌丝块的菌落生长直径，同时在步骤（9）所述的另一PSA培养基圆片中以无菌水代替细菌发酵液作为空白对照。