[发明专利]一种微生物催化不对称水解制备(-)γ-内酰胺的方法

权利要求书

1.一株产高对映选择性(+)γ-内酰胺酶酶活的菌株，其分类命名为戴尔福特菌（Delftia sp.）JNU-GL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5755。

2.一种用权利要求1所述菌株微生物立体选择性水解外消旋(±) γ-内酰胺，制备(-)γ-内酰胺的方法，其特征在于，采用具有立体选择性(+)γ-内酰胺酶酶活的微生物菌株，在水相体系中，以(±) γ-内酰胺为底物，进行不对称水解拆分制备(-)γ-内酰胺，步骤如下：

（1）微生物菌株：戴尔福特菌（Delftia sp.）CGMCC No.5755；

（2）微生物发酵培养条件：优化的培养基组成以g/L计为：蔗糖 5－100，蛋白胨 5－50，牛肉膏 5－50，乙酰胺 5－150，MgSO₄ 0.5－5，NaH₂PO₄ 1－10，Na₂HPO₄ 1－10，pH 4－10；培养温度20－40℃；培养时间1－3天，将发酵液离心获得湿菌体；

（3）反应体系的配制：以(±) γ-内酰胺为底物，用pH 4－10、0.01－0.5 M磷酸盐缓冲液水相反应体系，底物浓度为2 g/L－600 g/L；

（4）全细胞生物催化反应：在步骤（3）的单一水相反应体系中，加入5 g/L－100 g/L湿菌体，反应温度为25－45℃，反应时间为2－24 h，摇床转速为100－300 rpm；

（5）转化液的处理和分析：微生物催化反应之后的转化液，离心除去菌体，上清液采用乙酸乙酯萃取，加适量无水硫酸镁干燥后，进行手性HPLC检测；

（6）产物的分离提取：采用乙酸乙酯萃取产物，无水硫酸镁干燥，在30－80℃下蒸发浓缩，-20－4℃下冷却结晶，得到高纯度的(-)γ-内酰胺，光学纯度95.0%－99.9%，化学纯度为95%－99%。