[发明专利]一种成纤维细胞培养液

说明书

 

技术领域

本发明涉及动物细胞培养技术领域，尤其涉及一种成纤维细胞培养液。

背景技术

细胞是生物体的基本结构和功能单位，在生命科学迅速发展的当今社会，动物克隆、干细胞、乳腺生物反应器转基因动物、人造组织和器官等重大科学进展都离不开细胞工程所建立的平台。细胞工程是人类按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官，甚至个体，从而培育创造优秀品种或产品的综合性生物工程。当前细胞工程所涉及的主要技术领域有细胞培养、细胞融合、细胞拆合、染色体操作及基因转移等方面。细胞工程已经渗透到人类生活衣食住行等许多领域，如治疗疾病的药物、预防疾病的疫苗、美容的化妆品、吃的食物等。细胞培养是细胞工程得以产业化应用的平台和基础，通过培养出大量的细胞用于生产和研究才能生产出细胞工程产品。在培养应用的众多细胞中，成纤维细胞是应用最广泛的细胞之一。成纤维细胞具有来源广泛，因细胞呈现纤维状形态而得名，各种组织器官中均含有大量的成纤维细胞，成纤维细胞在组织中常用于受损组织器官的快速修复。目前，成纤维细胞已广泛应用于动物克隆、干细胞、转基因乳腺生物反应器动物、人造组织和器官等重大科学研究和生产实践。但是，高质量和生长性能的成纤维细胞对于细胞工程产品的质量和效率至关重要。

在成纤维细胞的培养生长过程中，细胞培养液是必不可少的。目前的常规细胞培养液，在使用中存在成纤维细胞生长速度慢，增殖能力弱，培养的成纤维细胞经常不具有典型的纤维状形态，以及抗凋亡能力较弱而且容易衰老的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种成纤维细胞培养液。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种成纤维细胞培养液，由以下组分组成：

10％ 胎牛血清，4 ng/ml 碱性成纤维细胞生长因子，2.5 μg/ml Plasmocin，100 U/ml青霉素，100 μg/ml链霉素，高糖DMEM培养液补足到100%。

碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是成纤维细胞生长因子蛋白（fibroblast growth factors，FGFs）家族中的一员。目前已发现至少22种FGF， bFGF是哺乳动物和人体中一种非常微量的活性物质，具有广泛的生理功能和重要的临床应用价值。bFGF具有能刺激新生血管形成，参与创伤愈合和组织再生，促进胚胎组织发育和分化等，此外还与肿瘤的发生发展密切相关。近年来，重组bFGF已被应用于临床治疗创伤、溃疡及神经系统等疾病。

在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA、RNA及蛋白表达，从而导致细胞生长缓慢和质量较差。Plasmocin属于新一代杀菌抗生素，能强烈的作用于感染支原体的细胞，杀灭支原体。同时， Plasmocin能以一种较低的作用浓度发挥广谱的抗革兰氏阳性和革兰氏阴性的细菌作用，比如能作用于耐青霉素与链霉素的细菌，已经证实Plasmocin对真核细胞没有毒性，不影响细胞本身的代谢。

本发明的有益效果是：

本发明设计的成纤维细胞培养液与常规成纤维细胞培养液相比，能使成纤维细胞生长速度快，增殖能力强，培养的成纤维细胞具有典型的纤维状形态，及具有更强的抗凋亡能力而不易衰老。因此，本发明设计的成纤维细胞培养液培养的成纤维细胞应用于生产实践将会生产出更高质量和效率的细胞工程产品。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是在本发明设计的成纤维细胞培养液中生长的纤维状细胞形态。

图2是在常规成纤维细胞培养液中生长的纤维状细胞形态。

具体实施方式

一、材料与方法

1、成纤维细胞的培养

取牛、羊、猪和小鼠的成纤维细胞进行培养，实验组采用设计的新型成纤维细胞培养液（下称新型培养液），新型培养液的组分为：10％ FBS＋4 ng/ml 碱性成纤维细胞生长因子＋2.5 μg/ml Plasmocin＋100 U/ml青霉素＋100 μg/ml链霉素＋高糖DMEM培养液。对照组采用常规成纤维细胞培养液（下称常规培养液），常规培养液的组分为：10％ FBS＋100 U/ml青霉素＋100 μg/ml链霉素＋高糖DMEM培养液。分别取不同物种相同培养代数的成纤维细胞，采用上述两种培养液进行培养。

2、成纤维细胞的增殖能力检测