[发明专利]一种α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测方法、底物和试剂

权利要求书

1.一种α-L-艾杜糖醛酸酶活性测定方法，其特征在于它的原理如下：

R-α-L-艾杜糖醛酸 + H2O ^{α-L-艾杜糖醛酸酶酶}R-OH + α-L-艾杜糖醛酸。

2.具体为：α-L-艾杜糖醛酸酶在特定条件下能够水解合成的本身无荧光的底物R-α-L-艾杜糖醛酸，释放游离的荧光分子R-OH，在特定的激发和发射波长下可检测到R-OH特异的荧光，由于α-L-艾杜糖醛酸酶水解底物的速率与释放荧光分子的荧光强度成正比，因此检测在特定激发波长和发射波长下的R-OH荧光值，就可以计算出α-L-艾杜糖醛酸酶的酶活力。

3.如权利要求书1所述的底物是R-α-L-艾杜糖醛酸，其特征在于它的通用结构式为：

具体描述该结构式的特征在于：在母体结构（α-L-艾杜糖醛酸）的1位C的醛基（-CHO）和具备荧光特征的R-OH特异连接生成R-α-L-艾杜糖醛酸，生成的R-α-L-艾杜糖醛酸已经连接了荧光基团R，但R-α-L-艾杜糖醛酸本身不具备荧光特征。

4.当α-L-艾杜糖醛酸酶在特定条件下特异的水解R-α-L-艾杜糖醛酸时又可以释放出游离的具备荧光特征的R-OH分子。

5. 如权利要求书1和2所述的底物R-α-L-艾杜糖醛酸以及合成该底物的具备荧光特征的R-OH，其特征在于R-OH是在物理和化学领域普遍被接受的任何具备荧光特征且能与-CHO进行反应的分子。

6.如权利要求书1-3所述的底物R-α-L-艾杜糖醛酸，其特征在于荧光分子R-OH是与α-L-艾杜糖醛酸上的1位C上的醛基（-CHO）连接而形成R-α-L-艾杜糖醛酸。

7.一种α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测试剂，其特征在于其主要成分包括：

   缓冲液                                       20—1000mmol/L

   pH范围                                       2—8.5

   稳定剂                                        0.01%—10%

   如权利要求书1-4所述的底物（R-α-L-艾杜糖醛酸）  0.005—10mmol/L

根据权利要求5所述α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测试剂，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、R-α-L-艾杜糖醛酸组成单剂试剂。

8.根据权利要求5所述α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测试剂，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、R-α-L-艾杜糖醛酸组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂组成；试剂2，由缓冲液、R-α-L-艾杜糖醛酸组成。

9.根据权利要求5所述α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测试剂，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、R-α-L-艾杜糖醛酸组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂组成；试剂2，由R-α-L-艾杜糖醛酸组成。

10.根据权利要求5-8所述α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测试剂，其特征在于：所述的稳定剂主要包括被物理和化学上普遍接受和使用的各种表面活性剂。

11.如权利要求5-8所述α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测试剂，其特征在于：所述的缓冲液中的缓冲试剂是被物理和化学上普遍接受的能将体系的pH值缓冲或稳定2—8.5的范围中的试剂。

12.如权利要求书1-9所述的α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测试剂，其特征在于，它可以用于检测待测样本中的α-L-艾杜糖醛酸酶的酶活力，特别是检测人体体液或组织或细胞样本中α-L-艾杜糖醛酸酶的酶活力，应用到临床检测或诊断与α-L-艾杜糖醛酸酶的酶活力相关的疾病。