[发明专利]一种固相片段法合成比伐卢定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种固相片段法合成多肽的方法，尤其是比伐卢定的固相片段法合成方法。

背景技术

比伐卢定(Bivalirudin)，是一种近年来应用于临床直接的、特异的、可抑性凝血酶抑制剂，其有效抗凝成分为水蛭素衍生物片段，可以直接通过特异性抑制凝血酶活性而发挥抗凝作用，作用可逆而短暂。早期的临床研究显示：比伐卢定抗凝治疗效果确切，且出血事件的发生率较低，和传统肝素抗凝治疗相比使用更为安全。佛罗里达奥克拉心脏病研究所的Bittl自己主持的一项研究显示，在不稳定型心绞痛及梗塞后心绞痛患者行冠状动脉成形术过程中，比伐卢定的效果比肝素好，比伐卢定组患者术后7天的总终点事件(死亡、血管再通术及心肌梗死)发生率少于肝素组(6.2％vs7.9％，P＝0.039)，出血副作用发生率亦更低(3.5％vs 9.3％，P＜0.001)。2000年12月美国食品药物管理局(FDA)批准比伐卢定在美国上市。美国胸科医师学会(ACCP)抗栓和溶栓治疗循证指南和美国心脏学会和心脏病学会2005年于PCI患者抗凝治疗指南指出，比伐卢定克服了肝素、低分子肝素及水蛭素的缺点，具有良好的临床应用前景。可替代肝素用于PCI、不稳定型心绞痛、急性心肌梗死溶栓的治疗，肝素诱导的血小板减少症的抗栓治疗；也可以用于外周动脉介入治疗、心肺移植手术及肾功能不全患者防栓抗栓治疗亦有良好作用，所以可作为普通肝素和IIb/1IIa受体阻滞剂的替代药和辅助药物。

2007年全球销售达2.55亿美元，目前市场应用正在不断扩大。然而，比伐卢定在我国尚未上市，MedicineS公司也没有在亚洲地区的上市计划，这在很大程度上延误了我国心血管医疗事业一尤其是冠状动脉血管成形术的发展。实现比伐卢定的规模化和产业化生产，能够很好地促进比伐卢定药物在我国医疗事业的应用，提高心脏手术的医疗水平。

比伐卢定化学式为：

D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH

目前国内关于比伐卢定合成报道的不多，其中专利号CN200910028793，提供一种比伐卢定的液相合成方法，这个方案主要是通过液相合成三个全保护的片段：N-端全保护的6肽、中段全保护的6肽、C-端全保护的8肽，然后将这三个片段依次在液相中依次缩合得到全保护的比伐卢定。该方案在规模化生产中产生大量的废液，产品也比较难纯化。上述方案工艺比较繁琐，而且产生的杂质多，产品纯度也比较低，不易进行大规模化生产。

发明内容

本发明提供了一种高收率、提成本、反应条件温和、环境污染小、有利于实现产业化的比伐卢定固相片段法合成工艺。

为了实现上述目标，本发明方案主要包括以下步骤：

1)由替代度为0.4～0.9mmol/g的Wang Resin和Fmoc-Leu-OH反应制备Fmoc-Leu-Wang Resin，再按序列依次连接12个含Fmoc保护基氨基酸，得13肽片段I-Wang Resin；

2)由替代度为0.4～0.9mmol/g的Wang Resin和Fmoc-Gly-OH反应制备Fmoc-Gly-Wang Resin，再按序列依次连接6个含Fmoc保护基氨基酸，得7肽片段-2-Chlorotrityl Chloride Resin，裂解得Fmoc保护N端的7肽片段II；

3)13肽片段I-Wang Resin与7肽片段II以固相片段法合成比伐卢定-Wang Resin，经脱保护，裂解，纯化冷冻干燥得比伐卢定。