[发明专利]一种中国番茄黄曲叶病毒卫星的组成型表达启动子有效
| 申请号： | 201210197844.0 | 申请日： | 2012-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN102732521A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 钱亚娟;张洁;周雪平;吴建祥 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/63;C12N15/82;C12N5/10 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 中国 番茄 黄曲叶 病毒 卫星 组成 表达 启动子 | ||
1.一种中国番茄黄曲叶病毒卫星的组成型表达启动子，其特征在于：所述启动子DNA序列为中国番茄黄曲叶病毒beta卫星分子的βC1 ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1、全长启动子SEQ ID NO: 2或串联启动子SEQ ID NO: 3所示DNA序列。
2.一种DNA构建体，其特征在于包括权利要求1所示的中国番茄黄曲叶病毒beta卫星分子的βC1 ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1、全长启动子SEQ ID NO: 2或串联启动子SEQ ID NO: 3，以及与之进行可操作连接的有效基因，其中所述有效基因包括杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗细菌基因或抗病毒基因。
3.一种利用植物细胞表达杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗细菌基因或抗病毒基因的方法，其特征在于包括如下步骤：
(a)以可表达的方式将杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗细菌基因或抗病毒基因连接到中国番茄黄曲叶病毒beta卫星分子的βC1 ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1、全长启动子SEQ ID NO: 2或串联启动子SEQ ID NO: 3所述的启动子DNA序列下游以获得重组DNA片段；
(b)将该重组DNA片段插入植物表达载体中；
(c)用上述重组表达载体转化植物细胞；
(d)培养该植物细胞表达杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗细菌基因或抗病毒基因。
4. 一种利用植物细胞制备蛋白质的方法，其特征在于包括如下步骤：
(a)以可表达的方式将编码所需蛋白质的DNA连接到中国番茄黄曲叶病毒beta卫星分子的βC1 ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1、全长启动子SEQ ID NO: 2或串联启动子SEQ ID NO: 3所述的启动子DNA序列下游，获得重组DNA片段；
(b)将重组DNA片段插入表达载体中，获得重组表达载体；
(c)重组表达载体经农杆菌或基因枪法转化植物细胞，培养转化的植物细胞以表达所需的蛋白质；
(d)从培养物中回收所需的蛋白质。
5.一种表达载体，其特征在于含有中国番茄黄曲叶病毒beta卫星分子的βC1 ORF的缺失启动子SEQ ID NO: 1、全长启动子SEQ ID NO: 2或串联启动子SEQ ID NO: 3所述的启动子DNA序列，其中所述载体是适用于植物细胞的质粒载体、噬菌体或病毒，所述载体能够插入杀虫剂基因、除草剂抗性基因、抗真菌基因、抗细菌基因或抗病毒基因。
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