[发明专利]促红细胞生成素模拟肽融合蛋白及突变体

权利要求书

1.一种融合蛋白，由促红细胞生成素模拟肽(erythropoietin mimetic peptides，EMP)通过连接肽(Linker)与IgG-Fc或IgG-Fc突变体形成，其通式为EMP-Linker-IgG-Fc或者IgG-Fc-Linker-EMP。

2.权利要求1所述EMP选自促红细胞生成素模拟肽及其突变体(SEQ ID NO：1)。

3.权利要求1所述Linker选自序列SEQ ID NO：2；SEQ ID NO：3；SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5；SEQ ID NO：6；SEQ ID NO：7或(GGGGS)n，其中n为1，2，3，4，5或6。

4.权利要求1所述Linker可以选自SEQ ID NO：8，其中n为0，1，2，3，4，5或6，或者为其它甘氨酸富集的连接肽。

5.权利要求1所述IgG Fc(铰链区-CH2-CH3)序列为人IgG1、IgG2或IgG4的Fc及其突变或缺失体，上述序列选自SEQ ID NO：9；SEQ ID NO：10；SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12，或者选自上述IgG-Fc序列的杂合体，其中IgG-Fc序列参照EU(Kabat)指数进行编号，重要的是上述IgG-Fc突变体选自序列SEQ ID NO：13；SEQ ID NO：14；SEQ ID NO：15；SEQ ID NO：16，上述突变位点可以是单位点突变或多位点突变组合，这些位点可选自如下：

Xaa₁＝Gln或Thr

Xaa₂＝Gln或Thr

Xaa₃＝Leu，Met或His

Xaa₄＝Ala，Ser或Asn。

6.根据权利要求1所述，更进一步，与促红细胞生成素模拟肽(EMP)相连的融合蛋白可以选自人血白蛋白或转铁蛋白，也可以选自人血白蛋白或转铁蛋白部分片段、突变体和缺失体。

7.权利要求1～5所述融合蛋白应用于人红细胞减少类疾病如贫血的预防与治疗，或者其DNA序列应用于基因治疗。

8.权利要求5所述融合蛋白突变体，是基于增加与FcRn的亲和力来进一步增加EMP在体内的半衰期。

9.权利要求1～5所述融合蛋白使用真核细胞进行表达，蛋白纯化过程中使用A或G蛋白葡聚糖凝胶层析柱。

10.权利要求1～5所述融合蛋白使用原核细胞进行表达。