[发明专利]一种棘白菌素类化合物的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种棘白菌素类化合物的纯化方法，尤其是指WF11899A的纯化方法。

背景技术

棘白菌素类化合物具有抗真菌作用，包括棘白菌素B、WF11899A、棘白菌素C、肺粘菌素A0、肺粘菌素B0等。这类化合物可以进一步制备得到半合成化合物，如卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净等。棘白菌素类化合物有微生物发酵得到，含有大量的副产物。这些副产物在后续的分离纯化中往往很难除去。

US5021403公开了一种棘白菌素化合物的色谱纯化方法，该方法包括反复的树脂吸附，以及硅胶层析，过程繁杂。W02008048627公开了一种棘白菌素类化学物的纯化方法，包括萃取、洗涤、沉淀等。沉淀过程中需要加混合溶剂，而且沉淀需要加硅藻土等载体，否则沉淀物成油状很难过滤，且提纯效果也不明显。US20100249371公开了一种棘白菌素化合物盐吸附剂纯化方法，包括反复的吸附、洗涤、洗脱等步骤。盐吸附剂稳定性不好，实际操作比较困难。这些专利提到棘白菌素类化合物的方法，特别涉及的是棘白菌素B的纯化方法，并不针对WF11899A的纯化。

发明专利US6506726、EP1137663、CN99815515公开了分离和纯化环肽类产品的方法，其包括：含有环肽化合物的混合物吸附到疏水的反相层析介质上，用连续地近乎线性的0.1-10％的乙酸水溶液进行梯度洗脱。该方法可以用来分离棘白菌素母核，但是在进行分离WF11899A时，0.1-10％乙酸梯度都无法洗脱化合物，且化合物在酸性条件下容易降解破坏。

发明专利CN201010606370.1公开了一种卡泊芬净大孔吸附树脂分离纯化的方法。该方法洗脱剂的浓度为10-45％。在溶剂浓度低于35％时，基本洗不出WF11899A。溶剂浓度40-45％时只能洗出少量化合物，导致洗脱时间和洗脱体积增加，且洗脱不完全。

所以，寻找一种简单而且能够制备高纯度的WF11899A的纯化方法显得十分重要。因此本发明公开一种高纯度WF11899A的制备方法。该方法得到的样品纯度高，方法简单，不使用混合溶剂等优点。尚没有任何报道公开过使用该方法分离WF11899A。

发明内容

本发明提供一种棘白菌素类化合物的纯化方法，包括预纯化的棘白菌素类化合物溶液的制备、树脂层析分离和结晶三个步骤。

在优选的实施方案中，预纯化的棘白菌素类化合物溶液的制备方法，包括如下步骤：

(1)菌丝体收集：通过离心或压滤等常规过滤方式收集菌丝体；

(2)浸泡：用适量的有机溶剂浸泡菌丝体，提取有效成分，得浸泡液；

(3)浓缩：减压浓缩浸泡液，除去有机溶剂，得到预纯化的棘白菌素类化合物溶液。

在优选的实施方案中，预纯化的棘白菌素类化合物溶液还可以采用常规的方法制备得到。

在优选的实施方案中，其中所述的树脂层析分离步骤包括吸附、洗涤、洗脱三个过程。

在优选的实施方案中，其中所述树脂优选聚苯乙烯类树脂，更优选HP20、HP20SS、HZ20SS、SP825、CG161、XAD1600、XAD-4。最优选HP20SS、HZ20SS、CG161。

在优选的实施方案中，其中所述洗涤过程采用一定浓度的有机溶剂水溶液进行。所述有机溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮等。优选乙醇、异丙醇。

在优选的实施方案中，其中所述洗涤过程的溶剂浓度以基本不洗出有效成分为准，比较合适的浓度为0-40％(V/V)，不同溶剂略有差异。

在优选的实施方案中，其中所述的洗涤过程先使水洗涤，然后再用有机溶剂的水溶液洗涤。

在优选的实施方案中，其中所述的洗脱过程使用有机溶剂的水溶液为洗脱溶剂，洗脱溶剂浓度为50-70％(V/V)，不同溶剂略有差异。其中所述的有机溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮等。

在优选的实施方案中，其中所述的结晶过程优选为将洗脱过程中收集到的洗脱液浓缩至浓度为100-500mg/ml，向浓缩液中加入一定量的溶剂，结晶。其中所述溶剂包括乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈、丙酮，优选异丙醇。所述溶剂的添加量为浓缩液体积的3-10倍，优选4-6倍。所述结晶在＜40℃下进行，优选-5-10℃。所述结晶过程可以在搅拌下进行，也可以静止条件下进行。所述结晶时间为4-48小时，优选6-12小时。

在优选的实施方案中，其中棘白菌素类化合物优选为WF11899A或其盐，

WF11899A具有如下化学结构：