[发明专利]鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、病毒性关节炎四联灭活疫苗的生产方法

说明书

技术领域

本发明是一种用于预防鸡的新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、病毒性关节炎四种疫病油乳剂疫苗的制备方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术

鸡新城疫（newcastle disease,ND）具有很高的发病率和病死率，世界各地多有发生，且一旦爆发将给禽养殖业带来毁灭性打击，是危害养禽业的一种主要传染病。OIE将其列为A类疫病。

鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis,IB)，该病可导致雏鸡、肉鸡发育缓慢，产蛋鸡产蛋减少和蛋品质下降等。OIE将其列为B类疫病。

鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease virus,IBD）是由双RNA病毒科中的传染性法氏囊病病毒引起的一种特殊疾病，损害幼鸡法氏囊。特征是腹泻、衰竭，法氏囊先发生显著炎症和增大，继之以萎缩，最后患鸡死亡。本病除造成一些雏鸡死亡外，还常引起病愈鸡免疫抑制，导致免疫接种失败，增加雏鸡对鸡新城疫等许多疾病的易感性。

鸡病毒性关节炎(Avian viral arthritis,AVA)是由禽正呼肠孤病毒（Avian orthoreovirus）鸡病毒性关节炎病毒(Avian viralarthritis virus,AVAV)引起的主要发生于肉用鸡的一种传染病,以侵害胫跖关节、趾关节及其肌腱为特征,故又称传染性腱鞘炎、腱裂综合症或腱滑膜炎等。目前本病分布广泛,世界各地均有发生。在急性发病鸡群中,特别是种鸡群,常因生长缓慢或停滞、体重减轻,饲养利用率低以及死淘率高等,给养鸡业带来巨大的经济损失。

国内外现在上市的商品化产品品种很多，但都是很单一的传统疫苗，多次使用疫苗尤其是灭活疫苗，不仅增加鸡场人力和物力负担，同时多次抓鸡的注射应激,还会影响生产性能，致使鸡群对疾病的易感性增大。加之近年来毒株的不断变异，使得虽然推出的多种选择的疫苗，但仍然出现控制不住疫情发展的局面。所以迫使我们在以往具有不散毒、抗体滴度高、免疫保护期长、受母源抗体影响小等优点的油乳剂灭活疫苗的基础上开发出更新更好更适合预防这四种流行性疾病的产品。

发明内容

本发明的目的是制备鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、病毒性关节炎的四种抗原，并进行合理复配制成鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、病毒性关节炎四种疫病油乳剂疫苗，可以有效预防鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、病毒性关节炎的发生，同时也可以大大减少人们的劳动强度，降低养禽业养殖户的风险，而且保证了公众健康。

该四联苗技术的主要相关内容和所采用的技术手段：

（1）选育的新毒株要经过血清学、分子生物学等试验进行大量的临床病料分析鉴定工作，最后选出效价高、免疫原性好并能抵御鸡传染性支气管炎流行毒攻击的一株较理想的制苗用毒株。

（2）在传统全病毒灭活疫苗的基础上结合基因工程亚单位疫苗的复配，并且保证各单一病毒在联苗中均有和单苗一样的效果。

（3）利用美国进口的Millipore浓缩机将抗原经过超强浓缩，抗体产生快，效价高，保护期长，降低疫病的发生及蔓延。(浓缩机的生产厂家，美国密理博。型号为CUP50)。

（4）技术方案主要包括以下步骤：

1）生产用菌毒种为La Sota株鸡新城疫病毒、M41株传染性支气管炎病毒、E.coli BL21/pET28a-VP2株表达IBDV VP2蛋白的大肠杆菌基因工程菌和禽正呼肠孤病毒（Avian orthoreovirus,本发明又称鸡病毒性关节炎病毒）CVCC AV2311株；

2）分别按常规方法用鸡胚繁殖La Sota株鸡新城疫病毒、M41株（CVCC AV1511）传染性支气管炎病毒和CVCC AV2311株病毒性关节炎病毒，收获病毒液后经浓缩和灭活工艺制备成灭活病毒液；用加卡那霉素的LB液体培养基培养表达IBDV VP2蛋白的大肠杆菌基因工程菌E.coli BL21/pET28a-VP2株（本发明或简称为“基因工程菌”），经过破菌、硫酸铵提取和灭菌工艺制备成表达的传染性法氏囊病毒VP2蛋白；

3）将以上制备的种灭活抗原混合后按常规方法制备灭活佐剂疫苗。

本发明的详细描述

1.疫苗生产用菌毒种的来源