[发明专利]一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法，属于生物分离材料领域。具体地说涉及一种用于以亲和层析色谱或扩展床吸附法从血液、血清、血浆、血浆组分、腹水、细胞培养液、细胞均化液、奶液、初乳等生物原料中分离纯化抗体的新型生物分离材料及其制备方法。 

发明背景 

生物分离介质是专门用于提纯和精制生物相关产品的一类材料。分离介质广泛用于医药行业、发酵行业、生物制品、血液制品、疫苗和基因工程产品分离。在纯化产品时，分离介质具有分离效果好、产品纯度高、使用范围广，而且还具有可以进行大规模连续自动化生产的特点，使之成为目前对高纯度和高附加值产品进行分离的首选方法。依赖分离介质的产品涵盖基因重组药物、抗体、疫苗、诊断试剂、生化产品、血液净化、基因芯片以及抗生素等。 

近年来，针对抗体的分离介质倍受重视。但是，抗体产品纯度往往要求较高，同时还要尽可能地保持其生物活性，传统分离介质难以满足要求。常规离子交换层析分离介质以及疏水作用层析分离介质能够结合抗体，但是特异性和选择性较差，造成分离步骤多，降低抗体的收率与活性；例如，人IgG抗体普遍使用Cohn-Oncley的四步分离法从血库血浆中提取，得到的IgG纯度仅85％，且易形成多聚体或聚集体；又例如使用离子交换层析法从单克隆抗体含3％牛血清的细胞培养液中直接提取IgG，抗体回收率仅为70％，且抗体仅占白蛋白的二分之一，使用硫酸铵沉淀法，纯度更低。 

目前，使用昂贵的protein A或基因重组蛋白质大分子作为亲和配体、专门用于抗体药物分离纯化的亲和分离介质，其选择性非常好，例如美国GE公司已商品化的MabSelect以及IgSelect等专门针对抗体的亲和分离介质产品，但这些蛋白质大分子配体价格昂贵，容易受到从分离前段工序带来的蛋白酶的降解，既降低分离介质的重复使用次数或寿命、稳定性低，又可能产生肽链碎片污染抗体产品、影响其质量与安全。以高效的小分子亲和配体取代这些昂贵的大分子配体，可解决传统大分子配体分离介质的生产成本、保存稳定性、掉肽链(leaking，大分子配体从微球介质上断链或形成碎片)等问题。美国专利(USPatent 5,652、348、5,719,269、7,144,743)描述了利用杂环配体与抗体的疏水相互作用进行吸附分离的新型分离介质及其制备方法，中国专利CN101284224描述了一种以巯基乙基吡啶和砜基为配基、以纤维素/无机增重剂复合微球为基质的分离抗体的扩张床吸附介质及制备方法，但存在介质生物相容性不够，且需要在碱性条件下操作、砜基易产生非特异性吸附等缺点。所有这些小分子配体存在一个更致命的问题：选择性比protein A或基因重组蛋白质大分子亲和配体低得多。因此，本发明除选择生物相容性更好的亲水凝胶微球作为介质的基质，主要是设计、制备选择性更好的小分子作为配体，更有效地实现抗体的分离纯化过程。 

发明内容

本发明的目的是，针对目前用于抗体药物分离纯化的亲和分离介质的诸多问题，提出一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法。这一方法具有如下具体特征： 

1、本发明所述的一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法，其特征在于将亲水性凝胶微球作为基质悬浮于均三嗪活化剂中制成活化基质，然后以偶联法对活化基质键合两个小分子配体；所述分离介质的组成结构为： 

其中Matrix表示基质，R1，R2表示两个相同或不同的小分子配体。 

2、本发明所述的所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix为亲水性凝胶微球，包括亲水性琼脂糖凝胶微球、亲水性葡聚糖凝胶微球、亲水性聚丙烯酰胺凝胶微球；但优选亲水性琼脂糖凝胶微球作为基质材料；基质的粒径为50-160微米，交联度为4-10％范围。 

3、本发明所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix与均三嗪之间可以通过-O-(醚键)，-NH-，-S-(硫醚键)相连接。 

4、本发明所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix与均三嗪之间还可以以包括但不限于下列一种加长的连接臂相连接： 

-O-CH2-CH2-CH2-X-，其中X＝O，N，S 

-O-CH2-CH(OH)-CH2-X-，其中X＝O，N，S 

-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-X，其中X＝O，N，S。