[发明专利]一种山羊无角间性（PIS）有害基因的检测方法

权利要求书

1.一种用于检测山羊无角间性（PIS）有害基因的分子方法，具有如下特征：首先设计三对引物，其中一对为PIS^-引物，用于扩增显性基因的DNA片段，另一对为PIS⁺引物，用于扩增含有隐性基因的DNA片段，第三对为对照引物NEI，用于扩增PIS基因的近邻DNA序列；再将上述三对引物分别在单管中进行PCR扩增产生相对应的DNA扩增产物，然后以琼脂糖凝胶电泳分离技术检测；根据扩增产物中DNA片段的有无及大小判断山羊的基因型。

2.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于三对引物具有如下序列特征：

PIS^--F 5’- AAGAGAGGTGCCCTGAATAGA -3’,PIS^--R 5’-CACTGCTTTTGGTGTGTATCC -3’;PIS⁺-F 5’- AAAGGGGAGTTGAAGAAG -3’,PIS⁺-R  5’-AAAAGACACACGGACTAC -3’; NEI-F 5’-CCTCATTGGAGTGCTAAG-3’,NEI-R 5’- ATCGGTCTACACCACAAC-3。

3.根据权利要求2所述的基因检测方法，其特征在于PIS^- 、PIS⁺ 、NEI三对引物的PCR，反应条件分别为95℃预变性5分钟； 94℃ 30秒，（PIS^--F/R ：60℃、PIS⁺-F/R ：52℃、NEI-F/R ：55℃） 30秒，72℃ 35秒，30个循环；72℃ 10分钟。

4.根据权利要求2和3所述的基因检测方法，其特征在于，PIS^- 、PIS⁺ 、NEI三对引物分别获得大小为141、449、300bp的扩增产物；如果扩增产物中含有141bp的片段，即为检测出显性等位基因PIS^-；如果扩增产物中含有449bp的片段，即为检测出隐性等位基因PIS⁺；能够扩增出300bp的片段是保证PIS基因检测有效性的必要条件。

5.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，2%_~3%琼脂糖电泳检测三对引物的扩增片段：基因型为PIS^- PIS^- 、PIS^- PIS⁺、 PIS⁺ PIS⁺的山羊分别具有（141、300bp）、（141、449、300bp）、（449、300bp）的片段组合，其对应的山羊表现型分别为正常、正常、间性。