[发明专利]一种刺参高温胁迫应答基因pcsk9

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域,具体涉及是一种刺参高温胁迫应答基因的全序列及其表达特性。

背景技术

温度是影响水生生物生长和生理活动的重要因子，直接影响到生物个体的生长发育、摄食代谢、繁殖存活等生命过程。刺参是我国北方海参的主要养殖种类，主要分布在黄、渤海，是典型的温带物种，限制其分布的主要因素就是海水温度。刺参具有“夏眠”的生态习性，夏眠期间消化道退化，体重也减轻，因此这一生态习性的存在明显延缓了刺参的生长速度，延长了养殖周期，给人工养殖造成了很大的弊端。 

刺参的地域性分布和夏眠的生态习性都与温度相关，关于温度对刺参的影响以及刺参对温度变化响应等方面的研究，在国内外已经有许多报道，但在分子水平上的研究很少，温度影响刺参活动及分布的分子机制尚不清楚。如能通过分析温度胁迫下刺参基因的差异表达，就有可能获得胁迫相关基因，并在分子水平上阐明其表达调控的模式。获得可以作为刺参热应激指标的标记基因，可为探讨刺参应答高温胁迫的内在分子机理提供新的资料，为热抗性刺参品种选育改良和刺参夏眠机制研究提供分子基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种刺参高温胁迫应答基因序列及其表达特性，为研究刺参的热激胁迫反应机理提供基因资源。

本发明提供了一种刺参高温胁迫应答基因是前蛋白转化酶枯草溶菌素9 -pcsk9基因，其cDNA序列全长为1338bp，如SEQ ID NO：1所示，其中1-31bp为5’非翻译区，1163-1338bp为3’非翻译区，开放阅读框为32-1162位核苷酸，编码376个氨基酸，如SEQ ID NO：2所示。本发明公开的前蛋白转化酶枯草溶菌素9 基因是筛选自刺参高温胁迫差异消减文库中的差异表达基因，消减文库克隆SSHP3H7T7测序获得前蛋白转化酶枯草溶菌素9 部分序列，后利用RACE技术获得该基因cDNA序列全长。

常温正常培养条件下pcsk9基因在刺参各组织中均有表达，体壁中的表达量最高，在呼吸树中表达量最少（图1）；高温胁迫后pcsk9在各组织中均表现为下调表达，其中呼吸树中表达量变化最显著（图2）。在15℃-30℃范围内，pcsk9随着温度升高其表达量总体呈现下调表达, 30℃约为15℃的1/2（图3）。在30℃高温胁迫0-3 h时间内，pcsk9表现为表达下调，表达量最小值0.5出现在2 h（图4）。

附图说明

图1为常温下pcsk9基因在刺参各组织相对表达量，以体壁组织中基因的表达量作基准为1；

图2为高温胁迫后pcsk9在各组织相对表达量，常温下各组织中基因的表达量为基准1；

图3为15℃-30℃范围内pcsk9相对表达量，以15℃条件下基因表达量作基准为1；

图4为30℃高温胁迫0-3 h时间内pcsk9相对表达量，以0 h时间点基因的表达量为基准1。

具体实施方式

下面对本发明做进一步详细说明。

1、刺参前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因的克隆