[发明专利]基于纳米金和硫堇信号放大检测谷胱甘肽的方法

说明书

技术领域

[0001]本发明属于电化学检测技术领域，特别涉及一种修饰电极的制备和一种信号放大技术的研制，在其应用上涉及谷胱甘肽含量的检测。

背景技术

[0002]谷胱甘肽是细胞内存在最丰富的小分子硫醇类化合物。还原型谷胱甘肽(GSH)(下称谷胱甘肽)是细胞内非蛋白硫氢基团的主要组成部分，在活组织中具有多种重要的生理功能。它不仅有着很重要的生理作用，其在细胞中含量的变化还是某些疾病和癌症的直接反映。

[0003]电化学方法具有操作简单、灵敏度高、仪器设备简单等优点。

[0004]离子液体碳糊电极是一种把离子液体代替液体石蜡作为粘合剂而制成的碳糊电极，由于离子液体具有高的电子导电性、好的粘性、宽的电化学窗口，因此离子液体碳糊电极常作为电化学传感器的基底电极，它具有比传统的玻碳电极更好性能。

[0005]石墨烯具有热导系数高、机械强度好、载荷子流动性好、比表面积大等优点。

[0006]电化学沉积纳米金具有大的比表面积，提高电子传递能力的作用。

发明内容

[0007]本发明的目的是利用硫堇在金纳米粒子表面的吸附作用构建信号放大技术，以谷胱甘肽切割二硫键作用实现电化学方法高灵敏度测定谷胱甘肽。

[0008]本发明所提供的方法包括以下步骤：

[0009](1)以离子液体为修饰剂制备离子液体碳糊电极。

[0010]所述的方法，其所述的离子液体可为阳离子为季铵盐离子、季鏻盐离子、咪唑盐离子和吡咯盐离子；阴离子为卤素离子、四氟硼酸根离子、六氟磷酸根离子组成的离子液体，如1-己基吡啶六氟磷酸盐等。

[0011](2)在氧化石墨烯溶液中利用恒电位沉积法在离子液体碳糊表面制得石墨修饰膜，然后以HAuCl₄为原料，使用恒电位法电沉积金，即可得到纳米金/石墨烯修饰离子液体碳糊电极，得工作电极。

[0012]所述的方法，其所述的离子液体碳糊电极可为离子液体碳糊电极、金属电极、非金属电极或氧化电极。

[0013](3)以L-胱氨酸(Cystine)或含有二硫键的物质和功能化的DNA1修饰磁性微珠，制备功能化磁性微珠，磁性微珠作为载体负载含二硫键的物质和功能化的DNA1。

[0014](4)利用谷胱甘肽切割L-胱氨酸二硫键作用，将(3)中制备的功能化磁性微珠表面的DNA1切割下来，释放DNA1；随后对释放出的DNA1进行测定，据此实现对谷胱甘肽的测定。

[0015](5)利用(4)中释放出来的DNA1对纳米金/石墨烯修饰离子液体碳糊电极进行修饰，在电极表面形成捕获DNA，用于后续实验中去捕获电化学探针。

[0016](6)电化学探针(EC probe)的制备。利用硫堇在纳米金表面的吸附作用，制备硫堇修饰的金纳米粒子，然后将DNA2负载其上，制备DNA2/硫堇/纳米金信号放大单元，即电化学探针。

[0017](7)电化学检测。将DNA1/纳米金/石墨烯修饰离子液体碳糊工作电极浸入电化学探针溶液中，利用DNA杂交作用，DNA1将DNA2/硫堇/纳米金信号放大单元捕获在电极表面，引起电极表面电活性物质浓度的变化，据此实现对谷胱甘肽的检测。

[0018]所述的方法，其所述的离子液体碳糊电极可为离子液体碳糊电极、金属电极、非金属电极或氧化电极。

[0019]所述的方法，其所述的电活性物质为硫堇、联吡啶钌、亚甲基兰以及含正电荷的电活性物质。

附图说明

[0020]图1为本发明的实验原理示意图。

[0021]图2为不同修饰电极在1.0mmol L^-1[Fe(CN)₆]^3-/4-和0.5mol L^-1 KCl溶液中的循环伏安图。

[0022]图3为不同浓度目标物的差分脉冲伏安法曲线。从a到f谷胱甘肽浓度依次为1.0×10^-12，1.0×10^-11，1.0×10^-10，1.0×10^-9，1.0×10^-8，1.0×10^-7mol L^-1。插图：浓度的对数对峰电流的关系曲线。

具体实施方式

[0023]下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但本发明的实施方法不限于此。

实例：

[0024]1本发明所用的试剂：