[发明专利]龙趸精子超低温冷冻保存应用方法

权利要求书

1.一种龙趸精子超低温冷冻保存应用方法，包括：精子采集、精子活力检测、冷冻保存液配制、精液稀释、精子超低温冷冻保存、精子解冻和检测、冷冻精子受精，其特征在于精子冷冻保存液配制：在蒸馏水中加入60g/L葡萄糖、10g/LNaCl、0.5g/L NaHCO₃、10％胎牛血清和10％二甲基亚砜配制而成。

2.根据权利要求1所述的龙趸精子超低温冷冻保存应用方法，其特征在于精子采集时利用50ppm丁香酚麻醉龙趸，人工挤压腹部采集精液，防止尿液和海水混入。

3.根据权利要求1所述的龙趸精子超低温冷冻保存应用方法，其特征在于精子活力检测时龙趸精子活力在90％以上的精液可用于冷冻保存。

4.根据权利要求1所述的龙趸精子超低温冷冻保存应用方法，其特征在于所述的精液稀释为冷冻保存液与精液以1∶1的比例稀释混合，放置在有冰块的保温盒平衡5min。

5.根据权利要求1所述的龙趸精子超低温冷冻保存应用方法，其特征在于所述的精子超低温冷冻保存为将稀释精液1ml注入2ml冷冻管中，将冷冻管置于-60--80℃的液氮蒸气中平衡10min，直接将冷冻管投入液氮中冷冻保存。

6.根据权利要求1所述龙趸精子超低温冷冻保存应用方法，其特征在于所述的精子解冻和检测为将精子冷冻管放入37℃水浴中解冻，镜检后冷冻精子活力平均达83.67％。

7.根据权利要求1所述龙趸精子超低温冷冻保存应用方法，其特征在于所述的冷冻精子受精为将解冻精子加入未受精卵中混合均匀，精卵比例为1∶200ml，静置5min后加入2倍于卵的海水受精。