[发明专利]一种Exendin9-39基因及其多肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是涉及一种Exendin9-39基因及其多肽的制备方法。

背景技术

Exendin9-39基因是含有31个氨基酸残基的小肽，它是由Exendin-4的39个氨基酸残基缺失N端的前8个氨基酸残基后得到的。Exendin-4发现与美国毒蜥蜴分泌的毒液中。其作用主要是动物体内的类胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）受体的激活剂，促进GLP-1与受体结合，诱导cAMP的产生，从而发挥出类似GLP-1的作用：增加葡萄糖依赖性的胰岛素分泌，抑制胰高血糖素的分泌，加速葡萄糖清除，延缓胃排空和诱发饱腹感、抑制食欲；还可以改善外周胰岛素抵抗等。而缺少8个氨基酸的exendin9-39却是GLP-1受体的抑制剂，其作用也与exendin-4完全相反：降低胰岛素的分泌、增加胰高血糖素的分泌、增加食欲等（R et al.Exendin-4is a high potency agonist and truncated exendin-(9-39)-amide an antagonist at the glucagon-like peptide 1-(7-36)-amide receptor of insulin-secreting beta-cells.J Biol Chem.1993Sep 15,268(26):19650-5.Schepp W et al.Exendin-4and exendin-(9-39)NH2:agonist and antagonist,respectively,at the rat parietal cell receptor for glucagon-like peptide-1-(7-36)NH2.Eur J Pharmacol.1994Oct 14,269(2):183-91.Thorens B et al.Cloning and functional expression of the human islet GLP-1receptor.Demonstration that exendin-4is an agonist andexendin-(9-39)an antagonist of the receptor.Diabetes.1993Nov,42(11):1678-82.）

早在1999年，Karim Meeran等用大鼠的实验证明，exendin9-39能够提高动物食欲，并能增加动物的体重。每天注射30nmol的exendin9-39于大鼠的侧脑室中，连续注射3天，与注射生理盐水的对照组相比，实验组大鼠平均每天的饲料消耗是21.9±0.5vs.19.5±0.4g P<0.001,最终体重增加7±2vs.2±1g;P<0.02（Meeran K,et al.Repeated Intracerebroventricular Administration of Glucagon-Like Peptide-1-(7-36)Amide or Exendin-(9-39)Alters Body Weight in the Rat.Endocrinology.1999Jan;140(1):244-50.）。

目前，exendin9-39主要采用化学合成，成本高（对原料氨基酸及仪器设备要求极高）、产量少。利用基因工程生产exendin9-39，不仅可以实现工业化的大规模生产、有效地降低生产成本，而且终产品污染各种有害化合物的机会绩效，产品更加安全。但关于exendin9-39的原核表达和提取纯化尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种Exendin9-39基因用于原核表达生产Exendin9-39多肽。

本发明另一目的是提供制备Exendin9-39多肽的方法。

根据遗传密码表，并考虑到大肠杆菌密码子的偏爱性，进行选择性优化，设计推导出exendin9-39基因的原核表达编码序列如SEQ ID NO.1所示。Exendin9-39基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。