[发明专利]血管紧张素Ⅱ化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的涉及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）是血管紧张素中最重要的组成部分，是由血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转换酶的作用下形成的，是一种8肽物质。血管紧张素Ⅱ与人体的血管平滑机、肾上腺皮质球状带细胞、心脏、肾脏器官的细胞上的血管紧张素受体结合，引起相应的生理效应。血管紧张素作用于血管平滑肌，可使全身微动脉收缩，动脉血压升高。血管紧张素Ⅱ是已知最强的缩血管活性物质之一。

血管紧张素Ⅱ是一种可通过内分泌、自分泌/旁分泌以及胞内分泌发挥作用的激素。它具有强烈收缩血管的作用，全身微动脉收缩，外周阻力增加，血压升高；静脉收缩，回心血量增多。AngⅡ介导交感神经系统而促进去甲肾上腺素（norepinephrine，NE）释放，减少NE的再摄取，提高血管对NE的反应性，促进肾上腺释放儿茶酚胺，从而加强心功能同时通过血管的外周作用而提升血压。AngⅡ可强烈刺激肾上腺皮质球状带细胞合成和分泌醛固酮，后者促进远曲小管和集合管重吸收氯化钠及水并排钾；此外，AngⅡ尚可直接刺激近球小管重吸收氯化钠、刺激垂体后叶释放抗利尿激素而增加水的重吸收；引起入球及出球小动脉收缩，导致肾小球血流量减少，滤过系数降低。故AngⅡ有调节水盐平衡、保证循环血量、维持血压和减少尿生成的作用。所以血浆中血管紧张素II含量的测定，可为多种高血压和肾脏疾病的分型与诊断提供依据。

目前，国内外对血管紧张素II的检测较少，其中有放射免疫分析法，酶免法，化学发光法等。放射免疫分析法有放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤等缺点。随着标记免疫技术的迅速发展，各种新的检测方法层出不穷，例如ELISA方法、时间分辨免疫分析法、免疫荧光法、化学发光发等。其中化学发光免疫分析法具有敏感性高、特异性强、检测范围广、速度快等优点，越来越受到人们的关注。

发明内容

本发明要解决的问题是提供血管紧张素II的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，解决了灵敏度低，检测范围窄的缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种血管紧张素Ⅰ化学发光免疫定量检测试剂盒包括：AngⅡ抗体包被板、辣根过氧化物酶标记的AngⅡ、AngⅡ校准品、AngⅡ质控品、发光液A液和B液、20倍浓缩洗液。。

所述的血管紧张素Ⅱ抗体包被板的固相载体为96孔或48孔的白色微孔板。所述的血管紧张素Ⅱ化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的辣根过氧化物酶纯度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL。所述的发光液A包含0.7gL鲁米诺和0.165gL对碘酚；发光液B包含0.675gL过氧化脲。所述的20倍浓缩洗液包括75.5gL Tris，120gL NaCl，5mL／L Tween-20，1gLProclin300。

一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤：

1）AngⅡ抗体包被板制备

将AngⅡ抗体加到pH9.6碳酸盐缓冲液中混匀，在每个微孔板的孔中加100uL，于4℃冰箱中放置过夜，用洗涤液洗涤五次之后，用牛血清蛋白溶液对微孔板进行封闭，弃去孔内液体后，将酶标板干燥，密封，即得经AngⅡ抗体包被的微孔板；

2）辣根过氧化物酶标记AngⅡ，得AngⅡ酶结合物；

利用高碘酸钠氧化法，将AngⅡ与辣根过氧化物酶连接在一起，形成经辣根过氧化物酶标记的AngⅡ；

3）AngⅡ校准品；

将AngⅡ抗原用校准品稀释液配制成不同浓度的校准品（浓度分别为0，20，50，150，400，1000pg/mL），分装，贴标签，储存于2~8℃。

4）AngⅡ质控品的配制：在正常人血清中加入适量的AngⅡ纯品，配制低值质控品（QcL）和高值质控品（QcH），其浓度的平均值分别为78.50pg/mL和492.94pg/mL。

5）配制发光液A液和B液；

A液是含有0.7g／L鲁米诺和0.165g／L对碘酚的pH8.6的5mmol／LTris·HCl缓冲液为；B液是浓度为0.675g／L的过氧化脲，用工艺用水配制。

6)配制20倍浓缩洗液；

20倍浓缩洗液的配方如下：75.5gL Tris，120g／L NaCl，5mL／L Tween-20，1g／LProclin300。