[发明专利]山大颜提取物及其制备方法与抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物及化学药物领域，具体涉及山大颜提取物及其主要成分的制备方法和在抗肿瘤方面的应用。 

背景技术

目前，我国共有恶性肿瘤患者约450万人，每年新增病例200多万，死亡病例约170万。恶性肿瘤已经超越心脑血管疾病，成为威胁人类生命的第一大杀手^[1]。因此，研究开发抗癌药物一直是全世界医药界难点和热点。在我国，临床上中草药已被广泛应用于抗肿瘤，具有确切的疗效、较低的毒副作用、不易产生耐药等特点^[2-4]，越来越受到医药工作者的关注。据统计，目前抗肿瘤药物中约有60%来源于天然产物^[5-6]。 

山大颜为茜草科植物九节木（Psychotria asiatica L.）的干燥叶及嫩枝，又名大丹叶、暗山公、暗山香、刀伤木、青龙吐雾（台湾）。具有清热燥湿、解毒、杀虫等功效。临床上常用于治疗感冒、上呼吸道感染、急性扁桃体炎、肠炎、细菌性痢疾、高血压等疾病^[7-8]。近年有研究表明，山大颜能具有显著的抗老年痴呆的活性^[9]。同时也是国家非物质文化遗产——广东凉茶的常用中药之一，但是尚未见山大颜在抗肿瘤研究方面的报道。本专利首次公开了山大颜总三萜皂苷及其7种主要成分Psychotrianosides A~G的抗肿瘤作用。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种山大颜提取物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用。 

本发明的目的通过下述技术方案实现： 

一种山大颜提取物，其化学成分主要为三萜皂苷类，其中总三萜皂苷所占质量百分数为20~90%；所述总三萜皂苷主要是13-28环氧的乌苏烷型三萜皂苷，主要包括新化合物Psychotrianosides A~F(1~6)和从自然界中首次获得的天然产物Psychotrianosides G(7)（结构如图1所示）的混合物，此7种三萜皂苷占总三萜皂苷质量的20~80%；所述具有抗肿瘤作用的山大颜提取物HPLC检测总皂苷含有上述7种三萜皂苷的含量依次为：6~10%的1、10~40%的2、2~5%的3、3~8%的4、3~8%的5、3~8%的6、10~15%的7；所述百分比为质量百分比； 

所述具有抗肿瘤作用的山大颜主要成分是指三萜皂苷化合物Psychotrianosides A~G。 

所述Psychotrianosides A~G的制备方法包括以下步骤：山大颜经乙醇/水加热提取，减压浓缩得浸膏，浸膏加水搅拌，依次用有机溶剂萃取，正丁醇部位大孔树脂富集，乙醇/水洗脱，产物在经反相ODS分离纯化（甲醇/水洗脱）、重结晶后得到。 

所述山大颜提取物由如下方法制备而成：将山大颜经乙醇或甲醇加热回流或渗滤提取，减压浓缩得到浸膏，经大孔树脂富集，甲醇－水洗脱，得到山大颜提取物。所述乙醇或甲醇的体积浓度是65~90%。具体包括如下步骤：山大颜（Psychotria sp.）干燥茎经乙醇(或甲醇)80℃回流(或渗滤)提取，减压浓缩得到浸膏，浸膏经大孔树脂富集，甲醇—水(V/V=40~90%)梯度洗脱，得到山大颜提取物；该提取物经硅胶柱层析分离，用石油醚（PE）-乙酸乙酯（EtOAc）(100:0→0:100) 梯度洗脱（10个百分点为一个梯度），TLC追踪，得到18个馏分(C1-C18)，馏分C15经氯仿甲醇（10:1~10:3）梯度洗脱（每100ml为一个流份），TLC追踪，得两个馏分A1（10:1）和A2（10:3）；A1经反相碳十八（简称ODS）(V_MeOH/V_H2O=85:15)分离纯化，TLC追踪，依次得7,1。A2经ODS(V_MeOH/V_H2O=60:40)分离纯化，TLC追踪，10%硫酸乙醇显色，依次得2和3；C18经ODS(V_MeOH/V_H2O=50:50~60:40)纯化，TLC追踪，10%硫酸乙醇显色，依次得4、5、6。 

上述山大颜提取物能用于制备治疗肿瘤药物或保健品，所述肿瘤为胃癌、肝癌、肺癌、肠癌、鼻咽癌、乳腺癌、耐药型肝癌或耐药型乳腺癌。