[发明专利]一种纯化特利加压素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽纯化领域，特别涉及一种纯化特利加压素的方法。

背景技术

肝硬化(hepatic cirrhosis)是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。

肝硬化的发病机制为进入门脉循环的各充血静脉与体静脉之间可出现血管吻合、门静脉压升高现象。吻合最常出现于奇静脉与食管下端间，即食管静脉曲张。它们扩张后变得粗大，可破裂入食管腔，引起呕血危及生命。

特利加压素（Terli）是一个十二肽，如下所示：

特利加压素能够控制出血，引起内脏血管剧烈收缩从而降低门静脉压，广泛用于肝硬化并发症（食管胃静脉曲张出血、肝肾综合症、腹水）的治疗，同时还适用于泌尿生殖道及其他腹腔脏器出血、感染性休克、烧伤、急性肝功能衰竭、心脏骤停等适应症的治疗。

但是目前制备获得的特利加压素的纯度和收率都较低，不能满足工业化生产的需求，特别是无法大规模纯化特利加压素，制约了特利加压素的应用。因此，提供一种纯化特利加压素的方法具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种纯化特利加压素的方法。该方法通过预处理特利加压素粗品，经纯化、转盐后获得纯度达99.5%以上的特利加压素。本发明提供的纯化特利加压素方法操作简单易行，获得的特利加压素纯度高（可达99.5%以上，且最大单杂小于0.1%）、收率高（纯化收率可达85%以上，总收率可达50%以上），符合产业化要求，一批次可获得1000克以上的精肽。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种纯化特利加压素的方法，包括如下步骤：

步骤1：获得特利加压素粗品；

步骤2：取特利加压素粗品预处理后，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以浓度为0.1～0.8%的高氯酸和浓度为0.01～0.08%硫酸水溶液制得混合溶液，用碱调节混合溶液的pH值为2.0～3.5后作为A相，以乙腈为B相，按照B相为10%～40%的梯度进行洗脱，制得特利加压素第二粗品；

步骤3：取特利加压素第二粗品，采用离子交换法转盐，即得。

作为优选，特利加压素粗品由液相合成法或固相合成法合成。

作为优选，步骤2中预处理为取有机溶剂溶解所述特利加压素粗品，加入抗氧化剂获得特利加压素粗品溶液。

作为优选，步骤2中有机溶剂的浓度为20～100%。

作为优选，以g/L计，步骤2中特利加压素粗品与有机溶剂的质量体积比为20～100：1。

作为优选，步骤2中特利加压素粗品与抗氧化剂的质量比为100:2～8。

作为优选，步骤2中A相与B相的体积比为10～79:80。

作为优选，步骤2中预处理还包括取特利加压素粗品溶液加水获得特利加压素粗品第二溶液，特利加压素粗品第二溶液中有机溶剂的体积百分数低于20%。

作为优选，步骤2中有机溶剂为乙腈或甲醇。

作为优选，步骤2中抗氧化剂为抗坏血酸或抗坏血酸盐中的一种或两者以上的混合物。

作为优选，步骤2中抗坏血酸盐为抗坏血酸钠、抗坏血酸钾。

作为优选，步骤2中碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氨水中的一种或两者以上的混合物。

作为优选，步骤3中转盐包括如下步骤：

步骤a：取碱溶液活化树脂，获得活化后的树脂，取特利加压素第二粗品加入到活化后的树脂中混合，过滤收集第一滤液；

步骤b：收集过滤后的树脂用水清洗，过滤后收集清洗液;

步骤c：取清洗液与第一滤液合并，经第一浓缩获得第一浓缩液，取第一浓缩液重复步骤a、步骤b，获得第二滤液；

步骤d：取第二滤液加入冰醋酸，经第二浓缩后获得第二浓缩液、冻干。

作为优选，树脂为强碱型阴离子交换树脂。

作为优选，特利加压素第二粗品与活化后的树脂的质量比为5～15:100。

作为优选，以g/mL计，第二滤液与冰醋酸的质量体积比为1:0.025～0.1。