[发明专利]一种山葵组培苗瓶外生根方法

说明书

技术领域

 本发明涉及一种植物繁殖方法，主要涉及一种山葵组培苗瓶外生根的方法。

背景技术

山葵(Wasabia japonica Matsum.)为十字花科山嵛菜属植物，其根茎磨制的浆液是调味食品绿芥末的原材料。山葵不仅芳香味美，而且还是一种特殊的食用保健植物，具有刺激食欲、抑菌杀虫、抗癌的功效。由于山葵对环境条件的要求十分苛刻，只能生长在湿润水质越冷越清的冷凉山区，适宜其生长种植的地方有限，导致国际市场上的山葵产品极为稀缺。山葵产业化生产，种苗是关键。采用组织培养的方法繁殖山葵，不仅种苗质量高，而且可以避免种苗病害传播。但现有山葵组织培养技术采用的是瓶内生根方法，该方法包括初代培养、继代培养、瓶内生根、驯化和移栽等五个阶段，存在繁殖周期长和生产成本高的问题。

发明内容

本发明的目的在于建立一种山葵组培苗瓶外生根方法，缩短山葵组培种苗生产周期，降低山葵组培种苗生产成本。

本发明所采用的技术方案主要包括以下几个步骤：

第一步，将山葵的顶芽或侧芽消毒后取芽尖；

第二步，将芽尖接种于不定芽诱导培养基；

第三步，将芽苗在继代培养基中继代培养；

第四步，将芽苗驯化后切成单芽；

第五步，将山葵单芽插入土壤基质中，培养条件为相对湿度保持在80%～90%，温度控制在20℃～28℃。

　　不定芽是指将所述山葵顶芽或侧芽，用自来水洗净后，超净工作台上剥去其最外层，再用70%酒精表面消毒30～60 s后在显微镜下取茎尖，接种于不定芽诱导培养基（MS + NAA 0.5 mg·L^-1＋6-BA 0.5 mg·L^-1＋蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,PH 5.8）上，17±1℃培养，每25天在继代培养基（MS + 6-BA 1 mg·L^-1＋蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,PH 5.8）中继代一次。继代培养25d后，松开瓶盖，在驯化室炼苗3d，再从瓶内取出无根苗，把上面残留的培养基清洗干净，将芽苗高度大于2cm的健壮山葵丛芽苗切成单芽，芽的基部在浓度为500 mg·L^-1的IBA溶液中速蘸3s。山葵芽苗扦插的土壤基质按以下配制：取松树下表层腐殖质土，伴20%的多菌灵一周后用装入穴盘，将依上法处理的山葵不定芽插入土壤基质中。移栽后立即浇0.1%多菌灵溶液定根。扦插结束后，搭小拱棚覆盖塑料薄膜和遮阳网，棚内相对湿度保持在80%～90%，温度控制在20～28℃。每周喷施1次促根剂和1/2MS营养液，培养4周后逐步揭去遮阳网和塑料薄膜。

山葵组培苗瓶外生根方法是把芽苗驯化、生根及移栽相结合，减少了一次无菌操作的步骤，节省了培养空间，有效地降低了生产成本。山葵组培苗瓶外生根方法在短期内即可获得大量的生根苗，并因种苗带土移栽，成活率高，还适于长距离运输和异地移栽。试管苗瓶内生根技术环节的费用占整个组织培养育苗费用的35%～75%，而利用近年来研究成功的种苗瓶外生根新技术可以大大降低生根环节的费用。山葵组培苗瓶外生根方法不仅缩短了山葵种苗的繁育周期，而且极大的降低了山葵组培苗培养成本，具有重要的意义。

具体实施方式