[发明专利]一种抗皮肤鳞状细胞癌药物antagomir-365-2

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种抗皮肤鳞状细胞癌药物antagomir-365-2。

背景技术

皮肤癌作为白色人种中常见的恶性肿瘤之一，其发病率在白人中超过其他所有恶性肿瘤的总和，而近年来其发病率在我国出现了逐年上升的趋势并且呈现年轻化。根据最初的关于限制消耗臭氧物质的国际协议预测，到2100年，欧洲的西北地区和美国皮肤癌发病率可能会增加一倍，2060年将导致一个10%的增长高峰。

目前，对皮肤癌的临床治疗仍以手术、放疗、激光等综合治疗为主，在已经对后基因组计划进行研究的今天，皮肤癌的致病基因已经较成功的在分子水平上得到了确认，但是如何找到肿瘤的靶向治疗基因，并对其进行基因治疗仍是一大难题。

近年来，在小分子RNA中新发现了一类与调节基因表达密切相关的小分子非编码单链RNA即微小RNA（microRNAs，miRNAs）。随着研究的深入，越来越多的miRNA被发现，它不仅参与细胞分化成熟障碍、增殖失控，而且与细胞永生化为本质的肿瘤疾病密切相关，人类肿瘤细胞和肿瘤组织内miRNA的表达水平和类型都与正常细胞和组织明显不同，并且已经发现的人类miRNA大部分(52%) 都位于已知的肿瘤相关基因组区域内或已知的基因脆性位点。最近的证据表明，miRNA 突变或者异位表达与多种人类癌症相关，miRNAs 可以起到肿瘤抑制基因或者癌基因的功能。

在人类基因组序列中，我们发现miR-365是 UVB敏感的miRNA，是引起皮肤癌的一个重要的环境因素。miR-365为一种成熟的miRNA，它由两种前体pre-miR-365-1和pre-miR-365-2剪切而来。但是经RT-qPCR在皮肤癌细胞中检测发现成熟miR-365来自前体pre-miR-365-2。antagomir是经过特殊化学修饰的miRNA拮抗剂，通过与体内的成熟miRNA强竞争性结合，阻止miRNA与其靶基因mRNA的互补配对，抑制miRNA发挥作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗皮肤鳞状细胞癌药物antagomir-365-2。

本发明所采取的技术方案为：

一种抗皮肤鳞状细胞癌药物antagomir-365-2，所述antagomir-365-2是一种经化学修饰的反义寡核苷酸，其核苷酸序列为：5’-AUUACGGGGAUUUUUAGGAAUA-3’ （SEQ ID NO:1），序列的5'末端连续2个碱基以及3'末端连续4个碱基经硫代磷酸修饰，3'末端经胆固醇标记，全部碱基经甲基化修饰。

优选的，所述antagomir-365-2分子量为8828.2。

上述的antagomir-365-2在制备治疗皮肤鳞状细胞癌药物中的应用。

本发明设计合成的antagomir-365-2可以有效抑制体内成熟体miR-365功能。本发明设计合成的antagomir-365-2经过特殊的化学修饰连接，能直接进入细胞内，故在细胞实验中不需要转染试剂，从而避免了转染试剂包装过程的复杂步骤及其对实验的影响。本发明的antagomir-365-2可直接涂覆于患处，其可克服细胞膜、组织等障碍富集于靶细胞，故在动物实验中可局部直接给药，作用效果持续时间可长达6周，稳定性效果好。

本发明的有益效果是：

本发明的抗皮肤鳞状细胞癌药物antagomir-365-2可以克服细胞膜、组织等障碍富集于靶细胞，直接进入体外培养以及体内成瘤的细胞内，进行体外和体内治疗皮肤鳞状细胞癌，在体外能有效地抑制肿瘤细胞的侵袭和转移，在体内能有效抑制肿瘤的生长和消除瘤块。本发明的antagomir-365-2对抗皮肤鳞状细胞癌效果显著，有望成为皮肤癌基因治疗的药物。

附图说明

图1是antagomir-365-2的结构图；

图2是antagomir-365-2的质谱图；

图3是antagomir-365-2的体外抑制肿瘤增殖结果； 

图4是antagomir-365-2的体外抑制肿瘤侵袭结果；

图5是antagomir-365-2的体外抑制肿瘤迁移结果；

图6是antagomir-365-2体内抑制肿瘤生长和消除肿块结果图；

图7是antagomir-365-2促进肿瘤凋亡的TUNEL荧光图。

具体实施方式

一种抗皮肤鳞状细胞癌药物antagomir-365-2的设计及克隆：