[发明专利]一种检测原料乳中β-激动剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测原料乳中β-激动剂的方法，尤其是一种用酶联免疫竞争法检测原料乳中β-激动剂的方法。

背景技术

食品中激素残留污染问题已引起全世界的广泛关注。乳及乳制品营养丰富，但在动物饲养过程中存在滥用激素（如β-激动剂）的现象，导致乳类食品中激素残留污染问题。对原料乳中β-激动剂含量进行检测，可有效控制原料乳的质量，提高后续产品的安全性。

目前，已可以通过酶联免疫竞争法快速检测原料乳中β-激动剂含量，其中直接在标准品/样品中加入酶结合物，有些方法还需要加入抗体，混合均匀后孵育。采用这种操作方法无法有效排除牛奶本身的本底干扰，直接用β-激动剂酶联免疫竞争法试剂盒检测时，其检测的准确性不够理想。

发明内容

本发明的目的是提供一种用酶联免疫竞争法检测原料乳中β-激动剂的方法，具有较高的准确性。

本发明提供了一种检测原料乳中β-激动剂的方法，包括：分别取含有不同浓度β-激动剂的标准品工作液，再各自分别加入牛奶稀释液并混匀，制成多个标准液；标准品工作液与牛奶稀释液的体积比为2:1；取原料乳加入样品缓冲液，混合均匀，制成待测液；原料乳与样品缓冲液的体积比为2:1；用β-激动剂的酶联免疫竞争法试剂盒对标准液和待测液进行测定并读取吸光值，分别得到标准液吸光值和待测液吸光值；根据标准液中β-激动剂的浓度及标准液吸光值绘制标准曲线；根据标准曲线及待测液吸光值计算得到原料乳中β-激动剂的含量；其中牛奶稀释液的配制方法为：取12g乳粉，用蒸馏水溶解并定容至100mL。其中，样品缓冲液优选为磷酸盐缓冲液，选用磷酸盐缓冲液和牛奶稀释液不但可更好地屏蔽原料乳中的成分对检测结果的影响，且其与原料乳混合后较为稳定，不易影响β-激动剂与抗体的反应。磷酸盐缓冲液的配制方法进一步优选为：取0.62g二水磷酸二氢钠、5.73g十二水磷酸氢二钠和9g氯化钠，用蒸馏水溶解并定容至1000mL；牛奶稀释液与磷酸盐缓冲液互相配合可以最大限度的降低本底的干扰。

在本发明检测方法的一种示意性实施方式中，进行测定时，标准液和待测液分别各自与酶标记物先在未包被抗体的微孔中进行混合，再分别加入包被抗体的微孔中。

本发明提供的一种检测原料乳中β-激动剂的方法，其采用酶联免疫竞争法进行检测，通过对标准品工作液和待测的原料乳进行预处理，实现较高的检测准确性。

具体实施方式

为了对发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现结合以下实施例说明本发明的具体实施方式。

实施例。

1、试剂及仪器：

牛奶稀释液：取12g乳粉，用蒸馏水溶解并定容至100mL；

样品缓冲液：选用磷酸盐缓冲液，其配制方法为：取0.62g二水磷酸二氢钠、5.73g十二水磷酸氢二钠和9g氯化钠，用蒸馏水溶解并定容至1000mL；

酶联免疫竞争法试剂盒：选用RANDOX公司的β-激动剂试剂盒，货号为NN5053；其中包含多个标准品工作液（标准品工作液中β-激动剂的浓度分别为0 ng/mL、0.1 ng/mL、0.25 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL和5.0ng/mL）、包被抗体的微孔、酶标记物、洗板液、底物溶液及终止液；

酶标仪：选用BioTek公司的Elx808酶标仪。

2、步骤：

a. 取不同浓度的标准品工作液各100uL，分别加入牛奶稀释液50uL并混匀，制成多个标准液； 

b. 取100uL原料乳，加入50uL样品缓冲液后，混合均匀，制成待测液； 

c. 取标准液和待测液各150uL，分别各自加入未包被抗体的微孔中，然后每孔加酶标记物150uL，用移液器吹打三次，充分混匀，分别转移150uL微孔中的液体至相应的包被抗体的微孔中，25℃下避光孵育1小时；孵育完成后每孔加入250uL洗板液洗板，重复洗板三次；洗板完成后每孔加入125uL底物溶液，25℃下避光孵育20分钟；每孔再加入100uL终止液；立即用酶标仪在450nm下读取各孔吸光值，分别得到标准液吸光值和待测液吸光值； 

d. 根据标准液中β-激动剂的浓度及标准液吸光值绘制标准曲线，拟合方式为四参数逻辑拟合； 

e. 根据标准曲线及待测液吸光值计算得到原料乳中β-激动剂的含量。

3、准确性验证。