[发明专利]C型口蹄疫病毒快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，确切讲是一种用于检测牛或猪或羊以及相关牛或猪或羊的产品是否感染C型口蹄疫病毒的试剂盒。

背景技术

口蹄疫(Foot and mouth disease，FMD)是一种由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，FMDV)引起的危害牛、猪、羊等偶蹄动物的严重的急性热性高度接触性传染病。由于其传播速度快，不易控制和消灭，严重危害世界动物贸易，被世界卫生组织列为必须上报传染病之一。

口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科（picornaviridas）中的口蹄疫病毒属（aphthavirus）。共包括A、C、O、Asia I、SAT I、SAT II及SAT III型7个血清型，各血清型之间无交叉保护力。FMDV的病毒粒子直径20-25nm，为正二十面体结构，近似圆形；基因组为全长8,500（nt）的正链RNA，包括一个开放阅读框（open reading frame，ORF），5’-非编码区（5’-Untraslated Region，5’-UTR）和3’-非编码区（3’-Untraslated Region，3’-UTR）；ORF编码病毒多聚蛋白，依赖于自身编码的蛋白酶（L、2A、3C）及少数的宿主因子，在经过3级裂解后，形成4种病毒结构蛋白（VP4、 VP2、VP3和VP1）和9 种非结构蛋白（Lab、Lb、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D）；四种结构蛋白各60分子构成病毒颗粒， VP1靠近由五个原粒组成病毒表面的小洞，VP2和VP3位于远端，VP4则完全位于衣壳里面。

尽管目前国内外对口蹄疫的病原学、血清分型、诊断做了大量的研究，但口蹄疫病毒几乎遍及世界各地，口蹄疫对偶蹄类经济动物的威胁众所周知，它的发病率和造成的经济至今仍为各类传染病之首。为了确定口蹄疫是否在某一地区存在，检测动物血清抗体的方法并非完全可靠，还必须通过通过病原学检测以确诊病原的存在。一般检测方法为生物学实验、血清型诊断技术和分子生物学技术等诊断技术，但是这些方法有的敏感性不高、有的特异性不强、有的检出率较低，即使病毒分离技术被认为是检测口蹄疫的金标准，但其确认结果至少需要7天，检测周期太长，并且这些技术普遍费用太高，存在二次散毒的隐患，一般基层很难开展此项工作。C型口蹄疫在我国周边亚洲地区具有流行史，对我国威胁较大。因此我们实验室利用在60年代从前苏联引进的C型口蹄疫毒株建立了一种快速诊断C型口蹄疫的诊断技术，完成对C型口蹄疫病毒的诊断和监控，对于防止其传入我国具有重要的战略意义。

中国发明专利200810034124.6公开一种用于检测O型口蹄疫病毒的LAMP试剂盒，该试剂盒由包含有六条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系构成。由于该专利的试剂盒中有六条引物，因此其制造成本与使用成本相对较大。其次，该专利使用中需要定时定量仪器，这使其应用受到很大限制。第三，使用该专利检测时只能得到两条电泳条带，这影响其检测灵敏度，并易造成检测结果识别的困难。

发明内容

本发明提供一种可克服现有技术不足，能进行快速、简便检测，具有较高灵敏度和更好经济性能的可检测出被检测牛或猪或羊，或牛或猪或羊的产品是否感染C型口蹄疫病毒的试剂盒。

本发明的C型口蹄疫病毒快速检测试剂盒中包括有两对LAMP引物，这两对引物分别是SEQ1、SEQ2、SEQ3和SEQ4，即：

 表1 本发明的试剂盒中的引物

                                                                                                                                                                                       

采用本发明的检测试剂盒，是从待检动物的器官拭子或OP液或血液或动物死体组织中提取其全基因组RNA，再以RNA为模板，以试剂盒中的特异性C型口蹄疫的引物进行多重RT-PCR，再对得到的产物进行电泳，根据电泳图谱分析被检动物是否感染有C型口蹄疫病毒。

本发明在应用中先应先将从待检动物的器官拭子或OP液或血液或病死动物的组织用生理盐水稀释或研磨成1:5的乳悬液，全基因组RNA提取的方法采用RNA/DNA试剂盒提取法，然后再进行后续处理。