[发明专利]一种豌豆EMS突变体库构建的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种豌豆EMS突变体库构建的方法，属于农业育种领域。 

背景技术

豌豆是世界第二大食用豆类作物，常年种植面积1亿亩，在农作物轮作倒茬、畜牧业和可持续农业发展中起着重要的作用。近年，随着鲜食豌豆、淀粉加工、畜牧业的发展以及种植结构的调整，豌豆产品收购价格上升，产值明显提高，使广大农户种植生产的积极性显著增加。冬季鲜食豌豆生产中肥料使用少、农药残留低等特点使其成为高端的绿色蔬菜，在保障食品安全和丰富人民菜篮子工程等方面发挥着重要作用。 

化学诱变具有成本低、使用方便、诱变作用专一性强等特点，是一种迅速发展的育种途径。甲基磺酸乙酯(Ethylmethame sulfonate，EMS)是一种良好的化学诱变剂，目前已成为在作物诱变育种中应用最广泛、应用效果最好的一种化学诱变剂。化学诱变始于20世纪初。Morgan(1910)，Mc-Dongal(1911)，Bauer(1916)，Sacarov(1936)等相继发现了化学物质能提高果蝇及某些微生物的突变率，1943年Ochlkers用脲脘处理月见草以后，化学药剂的诱变作用得到肯定。1967年Nilan用硫酸二乙脂(DES)处理大麦种子，育成了产量高、茎秆矮、抗倒伏的品种，开创了化学诱变在农作物育种上应用的先河。近几年来，国内外在诱变育种中应用诱导冬小麦、大豆、玉米、大麦、水稻等均获得了重大成就。中国农业科学院石家庄现代化研究所曾利用EMS处理冬小麦，M2代变异率达到15.7％以上，获得9个早熟、矮秆突变系，比原品种增产2.8％～20.5％；陈绍江等采用含有石蜡油的花粉诱变获得高油玉米突变体。王英培等用EMS处理大豆，筛选出一批高蛋白(45％～50％)、高亚油酸(60％以上)、低亚麻酸的优良突变系。据不完全 统计，国际上已有61个国家利用化学诱变在164种植物上育成2277个品种，但在豌豆上没有相关技术。本研究由农业部948项目：豌豆突变体库与普通菜豆抗逆资源引进与利用项目编号：2012-Z52资助。 

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种豌豆EMS突变体库构建的方法，为豌豆基因遗传分析及功能基因研究奠定了材料基础，为该品种的改良提供了重要的育种材料。 

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是： 

一种豌豆EMS突变体库构建的方法，包括以下步骤： 

(1)用蒸馏水浸泡豌豆种子4小时； 

(2)以100mM K3PO4，pH7.5作为缓冲液，配制质量体积比0.7％EMS溶液； 

(3)用配好的EMS在室温下浸泡种子，轻轻震荡8小时，转速20rpm/min； 

(4)用大量蒸馏水连续充分冲洗种子至无气味； 

(5)将洗好的种子称为M1代种子直接播于土壤中，待种子成熟后，单株收种，这些种子称为M2代； 

(6)M2代每株取5粒种成株系，单株记载相关性状； 

(7)群体诱导。 

所述相关性状为株高增高、分枝增多即5-6个、花器官外露、双花、叶片及荚表面蜡质缺失。 

本发明的有益效果是： 

本发明对豌豆EMS诱导浓度和时间进行了系统研究，总结归纳出豌豆EMS诱导的最佳时间和浓度处理，搭建出豌豆EMS诱导的技术平台，可以重复实施。利用该方法，对生产上大面积推广种植的中豌6号进行了诱变处理，获得2687个M2株系，并鉴定出株型、叶色和花等多种类型的突变体，为豌豆基因遗传分析及功能基因研究奠定了材料基础，为该品种的改良提供了重要的育种材料。 

具体实施方式

下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。 

本发明实施例包括： 

1.供试材料 

中豌6号。 

2.试验设计 

试验设5个时间点，4个浓度，1个清水对照。 

每个处理用100粒种子。所用缓冲液体积为100ml。 

3.试验方法 

3.1用蒸馏水浸泡豌豆种子4小时； 

3.2以100mM K3PO4，pH7.5作为缓冲液，配制质量体积比0.3％，0.5％，0.7％和0.9％的EMS溶液； 

3.3用配好的EMS在室温下浸泡种子，轻轻震荡(20rpm/min)4、6、8、10和12小时； 

3.4用大量蒸馏水连续充分冲洗种子至无气味；