[发明专利]一种提高麦冬多糖抗病毒活性的硫酸化修饰方法

说明书

一、技术领域

本发明一种提高麦冬多糖抗病毒活性的硫酸化修饰方法，属于中药多糖的结构改造技术领域。

二、背景技术

多糖广泛存在于动物、植物和微生物组织中，是由单糖聚合而成的天然高分子化合物，是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物大分子，具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等生物活性。多糖的生物活性与其结构有着密切的关系，特别是当引入某些化学基团时，使糖链的柔韧性和空间结构发生变化，从而引起多糖的生物学活性改变或使多糖产生新的活性。因此，对多糖结构进行适当的化学修饰是多糖领域研究的热点。

多糖的化学修饰主要有硫酸化、磷酸化的、硒化等方法。由于硫酸化修饰能显著提高多糖的抗病毒活性而倍受关注。常用硫酸化修饰方法有浓硫酸法、氯磺酸-吡啶法、氯磺酸-甲酰胺法、三氧化硫-吡啶法等。其中氯磺酸-吡啶法以其试剂易制备、反应条件相对简单、产物回收方便等优点而最为常用。影响氯磺酸-吡啶法修饰的主要因素有氯磺酸-吡啶配比、反应温度、反应时间。

麦冬是传统的滋阴类中药，具有养阴生津、润肺清心的功效，主治心腹结气、肺燥干咳、虚痨咳嗽、津伤口渴、心烦失眠、内热消渴、肠燥便秘等病症。研究表明，麦冬含有多种有效成分，包括甾体皂苷、多糖、高异黄酮类、氨基酸等。麦冬多糖是主要有效成分之一，具有增强免疫、抗心肌缺血、降血糖、耐缺氧、抗过敏等作用，而麦冬多糖的抗病毒活性鲜见报道。

根据文献和本研究室的前期工作证明，硫酸化修饰能够显著提高多糖的生物活性、尤其是抗病毒活性。本发明首次对麦冬多糖进行硫酸化修饰，建立了麦冬多糖的硫酸化修饰方法，基于产物的抗病毒活性优化了修饰条件，发现硫酸化修饰能显著麦冬多糖的抗病毒活性。

三、发明内容

技术问题本发明针对中药多糖生物活性低的问题，提供一种提高麦冬多糖抗病毒活性的硫酸化修饰方法，达到显著提高麦冬多糖的抗病毒活性的目的。

技术方案

一种提高麦冬多糖抗病毒活性的硫酸化修饰方法，包括：提取、纯化麦冬多糖，用氯磺酸-吡啶法对麦冬多糖进行硫酸化修饰，其特征在于，基于产物的抗病毒活性确定的最佳修饰条件为氯磺酸与吡啶的质量比1∶4，反应温度60℃，反应时间2h；并筛选出一种活性最好的硫酸化麦冬多糖产品。

有益效果

1.建立了麦冬多糖的硫酸化修饰方法，以产物的的抗病毒活性为指标，通过正交实验优化了麦冬多糖的硫酸化修饰条件。

2.证明硫酸化修饰能够显著提高麦冬多糖的抗病毒活性，并筛选出一种抗病毒活性最好的硫酸化麦冬多糖，为研制抗病毒制剂提供材料。

与现有技术相比，本发明优点如下：

1.麦冬多糖的硫酸化修饰国内外未见报道，本发明提供了一种提高麦冬多糖抗病毒活性的硫酸化修饰方法及其优化的修饰条件，填补了国内外研究的空白。

2.麦冬多糖的抗病毒活性未见报道，通过本发明的实施，证明天然麦冬多糖的抗病毒作用微弱，通过硫酸化修饰能够显著提高其抗病毒活性，并筛选出一种活性最好的硫酸化麦冬多糖，可以作为新型抗病毒药物的材料。

四、具体实施方式

1.麦冬多糖的提取

取麦冬饮片1000g，粉碎成0.3～1cm³小块，加95％乙醇2000mL浸泡12h，80℃水浴回流2次，每次1.5h，药渣晾12h后加9倍量水煎煮3次，时间依次为90、60、60min，合并滤液，浓缩至1000mL，2500rpm离心20min，上清液加入95％乙醇使醇含量达80％，4℃静置24h，回收乙醇，离心，沉淀冻干燥，得到粗的麦冬多糖。

2.麦冬多糖的纯化

将粗麦冬多糖用三氯乙酸法去蛋白，用蒸馏水溶解成50mg·mL^-1，上DEAE-纤维素-52(2.5cm×30cm)层析柱，用蒸馏水洗脱，流速1mL·min^-1，自动部分收集器收集洗脱液，每管5mL，用苯酚-硫酸法检测多糖，绘制洗脱曲线(得到1个峰)。合并含糖管洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到纯化的麦冬多糖(OPS)。

3.麦冬多糖的硫酸化修饰

(1)修饰条件优化由于试剂配比、反应温度、反应时间是影响多糖硫酸酯化的主要因素，在预实验的基础上，以氯磺酸与吡啶的体积比(A)、反应温度(B)和反应时间(C)为因素，按3因素3水平的L₉(3⁴)正交试验设计9种修饰条件(表1)。