[发明专利]2型糖尿病易感基因位点及检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及GRK5基因和RASGRP1基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)及其与2型糖尿病的相关性。本发明还涉及检测这些SNP的方法和试剂盒。

背景技术

糖尿病是一组以糖代谢异常为特征的由不同病理生理改变组成的综合征，不同患者之间具有较大的异质性，而其主要的两种病理生理改变为胰岛素分泌不足和胰岛素抵抗。

现在约有九千两百万成年人患有2型糖尿病。虽然营养状况和生活方式的改变、肥胖发病率的增加等是导致2型糖尿病发病率增加的重要因素，遗传因素同样有着不可或缺的作用。在过去几十年里，中国的2型糖尿病发病率显著升高。研究表明，包括中国汉族人群在内的东亚人群，其2型糖尿病的遗传易感性高于西方人群。

虽然已开展了一些2型糖尿病相关基因及多态性的研究，过去几年对2型糖尿病的相关风险位点已经有很多重要的研究发现，但是对于不同种族人群的2型糖尿病发病的遗传背景了解尚浅。

近年来，单核苷酸多态性(SNP)和单倍型(haplotype)在多基因疾病研究中的广泛运用，为在分子水平上研究2型糖尿病的发生和发展的机制开辟了全新的思路。同时，高通量、低成本的SNP检测手段的不断出现也为SNP大规模快速分型提供了可能。

SNP的存在与否以及等位基因频率存在人种及地域的差异，这就提示多基因疾病遗传异质性的存在，即同一疾病或性状在不同的人群中可能是不同的遗传因素造成的。

在欧美人群和部分亚洲人群中开展的2型糖尿病全基因组关联分析研究(GWAS)已经发现50多个2型糖尿病易感基因位点。然而这些易感基因的危险等位基因的效应值均很小，其总体效应值仅仅解释2型糖尿病遗传力的10～15%。

虽然已有许多关于各种基因多态性与2型糖尿病的研究，但没有证实GRK5基因或RASGRP1基因与2型糖尿病相关性的报道，更没有证实本发明所述的GRK5基因或RASGRP1基因SNP与2型糖尿病相关性的报道。

综上所述，鉴于糖尿病严重影响人们身体健康的疾病，为了尽早诊断和治疗2型糖尿病，本领域迫切需要寻找2型糖尿病易感基因(尤其是与中国汉族人群相关的2型糖尿病易感基因位点)，并开发检测2型糖尿病的方法、试剂盒，或相关的治疗药物。

发明内容

本发明的目的就是提供一种辅助诊断(尤其是早期辅助诊断)2型糖尿病的方法及检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供一种新的治疗2型糖尿病的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种体外非诊断性检测样品是否存在GRK5基因或RASGRP1基因的单核苷酸多态性的方法，包括步骤：

(a)用特异性引物扩增样品的GRK5基因或RASGRP1基因，得到扩增产物；和

(b)检测扩增产物中是否存在选自下组的单核苷酸多态性：

GRK5基因的rs10886471：即SEQ ID NO.:1中第134位C→T;

RASGRP1基因的rs7403531：即SEQ ID NO.:2中第164位C→T。

在另一优选例中，所述的GRK5基因的rs10886471对应于人第10号染色体的第121,139,393位(NCBI36/hg18)。

在另一优选例中，所述的RASGRP1基因的rs7403531对应于人第15号染色体的36,610,197位(NCBI36/hg18)。

在另一优选例中，所述的基因特异性引物具有SEQ ID NO:3和4所示序列、或SEQ ID NO:5和6所示序列。

在另一优选例中，所述的扩增产物的长度为100-2000bp且含有SEQ ID NO:1中第134位或SEQ ID NO:2中第164位。

在本发明的第二方面,提供了一种检测2型糖尿病的试剂盒，它包括特异性扩增GRK5基因或RASGRP1基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100-2000bp且含有SEQ ID NO:1中第134位或SEQ ID NO:2中第164位的扩增产物。

在另一优选例中，所述试剂盒还含有选自下组的试剂：

(a)与SEQ ID NO:1中第134位或SEQ ID NO:2中第164位的突变结合的探针；

(b)识别SEQ ID NO:1中第134位或SEQ ID NO:2中第164位的突变限制性内切酶。