[发明专利]胞壁酰二肽-抗CD20免疫偶联物制备方法及应用

权利要求书

1.一种胞壁酰二肽(MDP)-抗CD20(Rituximab)免疫偶联物，其特征在于其为式I所示的化合物或其盐，其中为抗CD20单克隆抗体，n₃为1、2、3、4、或5，n₄为0、1、2、3、4、或5，n₁为1、2、3、4、5或6。

式I。

2.如权利要求1所述的MDP-抗CD20免疫偶联物，其特征在于n₃＝3，n₄＝2，n₁＝3。

3.一种药物组合物，其中包含权利要求1或2所述的MDP-抗CD20免疫偶联物和可药用的载体。

4.一种药物制剂，其特征包含权利要求1或2所述的MDP-抗CD20免疫偶联物和可药用的载体。

5.如权利要求4所述的药物制剂，其特征在于制剂形式为：片剂、胶囊剂、缓释剂、注射剂、液体制剂、颗粒剂、丸剂。

6.权利要求1或2中所述的MDP-抗CD20免疫偶联物在制备治疗恶性淋巴瘤中的应用。

7.权利要求1或2中所述的MDP-抗CD20免疫偶联物在制备治疗表达CD20的肿瘤药物中得应用。

8.如权利要求7中所述的应用，其特征在于所述的肿瘤，具体为：白血病及乳腺癌、前列腺癌。

9.权利要求1或2中所述的MDP-抗CD20免疫偶联物在制备治疗由B淋巴细胞活化介导的自身免疫疾病药物中得应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于自身免疫性疾病为：系统性红斑狼疮、类风湿关节炎或特发性血小板减少性紫癜。

11.一种制备权利要求1或2中MDP-抗CD20免疫偶联物的方法，其特征在于：

化合物1的制备

连接臂中碳原子可为1～6，本研究以三个碳原子的连接臂为例，氩气保护下，在烧瓶中，加入Boc保护的连接臂N-Boc-1，3-丙二胺盐酸盐20mg，用3ml二甲基甲酰胺溶解，加入过量的三乙胺，然后加入N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶硫基)丙酸酯，室温搅拌反应1h，点板检测反应结束，后经过硅胶柱分离，真空蒸干，得产物化合物1；

化合物2的制备

氩气保护下，在反应瓶中，加入化合物110mg，加入1.5ml二氯甲烷，冰浴下搅拌10min，缓慢加入1.5ml三氟乙酸，冰浴条件下搅拌反应20min，点板检测反应结束，减压浓缩蒸干，并加入适量纯甲醇，再次蒸干，得到化合物2；

化合物3的制备

氩气保护下，在10ml反应瓶中，加入胞壁酰二肽5mg、化合物23mg，用2ml二甲基甲酰胺和四氢呋喃溶解，冰浴条件下加入1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑1.66mg及N-(3-二甲基氨基丙基)-N’乙基-碳二亚胺2.34mg，搅拌15min，恢复至室温，继续反应2～3h，点板检测反应完全，经硅胶柱，分离得化合物3，真空蒸干，得化合物3；

化合物4的制备

氩气保护下，在反应瓶中，加入鼠抗人CD20单克隆抗体(Rituximab)100mg，用含有2mmol/LEDTA、PH为8、浓度为0.1mol/L的PBS溶液，溶解调整浓度为8mg/ml，然后加入2-亚氨基四氢噻吩1.38mg，搅拌且室温反应1h，经Sephacryl S-100丙烯葡聚糖凝胶柱分离纯化，得到化合物4；

MDP-抗CD20免疫偶联物的制备

氩气条件下，在反应瓶中，加入化合物467mg，用2ml浓度为0.1mmol/L、PH＝8的PBS溶液溶解，然后加入化合物31.5mg搅拌，4℃下反应18-24h，点板检测反应完全，经Sephacryl S-100丙烯葡聚糖凝胶柱分离纯化，得到MDP-抗CD20免疫偶联物。

12.一种抗CD20单克隆抗体衍生物，其特征在于为式II所示化合物，其中为抗CD20单克隆抗体，n₂为5，

式II。

13.一种胞壁酰二肽MDP的衍生物，其特征在于为式III所示化合物，n₁为1、2、3、4、5或6，

式III。