[发明专利]一种茶树组培再生体系建立的方法

权利要求书

1.一种茶树组培再生体系建立的方法，其特征在于包括以下操作步骤：

1.1愈伤组织的诱导

采摘9月下旬生理成熟的茶籽作为茶树再生体系的原材料，即外植体；取茶籽5～10颗，将绿色的外壳剥去，用浓度75%的乙醇浸泡30秒，用无菌水洗3～4次；再用浓度0.1%的升汞溶液浸泡10分钟，用无菌水洗3～4次；在超净条件下剥去种皮，选取完整的、带有胚的剥去种皮的茶树籽接种于普通B₅培养基上，接种量为每40毫升接3～4颗；培养2周，有茶树愈伤组织长出；所述普通B₅培养基中加入了二氯苯氧基乙酸和6-糠氨基嘌呤，其中二氯苯氧基乙酸的加入量为2.5mg/L，6-糠氨基嘌呤的加入量为0.5mg/L；

1.2愈伤组织的继代和增殖

将茶树愈伤组织切下，并切成直径6～10毫米愈伤组织块，培养于普通B₅培养基上，接种量每40毫升接5～10块；培养条件为黑暗、温度为25～28度；每21天更换一次新鲜的普通B₅培养基；培养3周，得到鲜重可以增殖为原来的1.8～2.2倍的增殖愈伤组织；在此条件下，该愈伤组织可以稳定继代4年；

1.3不定芽的诱导，

将增殖愈伤组织接种到不定芽诱导培养基上，接种量每40毫升接直径6～10毫米大小的愈伤组织5～10块；培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替，温度为25～28度，光强为3000～6000勒克司；每4周更换一次不定芽诱导培养基；培养到第3周，有部分愈伤组织转绿；培养到第4周，不定芽的诱导率为15.71%，培养到2个月，诱导率上升为24.29%，培养到4个月，诱导率高达65.71%；所述不定芽诱导培养基以MS培养基为基础，加入吲哚丁酸和6-苄基腺嘌呤，其中吲哚丁酸的加入量为0.1mg/L，6-苄基腺嘌呤的加入量为2.5mg/L；

1.4不定芽的增殖

将新诱导出的不定芽切下，栽插到不定芽增殖培养基上，栽插量每100毫升接1～3棵；培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替，温度为27度，光强为4000勒克司；培养3周，大量的丛生芽长出；在此条件下，可以不断增殖不定芽；所述不定芽增殖培养基以MS培养基为基础，加入吲哚丁酸和苯基噻二唑基脲，其中吲哚丁酸的加入量为 0.1mg/L、苯基噻二唑基脲的加入量为0.015mg/L；

1.5壮苗

将丛生芽切下，栽插到壮苗培养基上，栽插量每100毫升接1～3棵； 培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替，温度为27度，光强为4000勒克司；培养3周，丛生芽平均可生长2～3厘米，得到茶苗；所述壮苗培养基以MS培养基为基础，加入吲哚丁酸，吲哚丁酸的加入量为0.3mg/L；

1.6生根和移栽

选取苗高达5厘米以上的粗壮无根的茶苗，直接栽入生根土壤中，培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替，温度为25度，光强为3000～6000勒克司；移栽初期，每日三次进行叶面喷水；培养8周，存活率为41.64%，所有存活的茶苗均生根，所述生根土壤配方为丹麦品氏托普泥炭土：蛭石按质量比1：1均匀混合。