[发明专利]制备癫痫发作动物模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备癫痫发作动物模型的方法以及使用该方法制备的癫痫发作动物模型。具体地，本发明涉及一种通过向灵长类动物的海马微量注射海人酸来制备癫痫发作动物模型的方法，以及通过该方法制备的灵长类动物癫痫发作模型。

背景技术

癫痫发作是大脑神经元异常放电引起的癫痫发作性脑功能异常。发作大多短暂并且有自限性，由于异常放电的脑功能区不同，临床可有多种发作表现，包括部分性发作或全面性发作，具体表现为运动、感觉异常，或是行为认知、植物神经功能障碍。全面性发作和复杂部分性发作，往往伴有不同程度的意识障碍。

癫痫是神经元的过渡同步异常放电，其发生机制主要是由于脑内兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸的失衡引起，即一方面脑内兴奋性机制增强，一方面抑制性减弱。前者通过脑内兴奋性氨基酸介导，主要是谷氨酸和天冬氨酸，它们通过与神经元上的谷氨酸受体结合，介导G蛋白耦联的离子通道，获者与兴奋性氨基酸受体(N-甲基-D-天门冬氨酸盐受体)结合，导致大量钙离子和钠离子内流，而钾离子、镁离子则外流，产生去极化。后者通过抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)介导，GABA释放出来与其受体结合后，氯离子通道打开，氯离子内流使突触后膜超极化。

目前的癫痫动物模型按照发作表现分为：急性单纯部分性发作，慢性单纯性部分性发作，复发部分性发作，全面强直阵挛发作，失神发作，癫痫持续状态，难治性癫痫；按照发生机制分为：遗传性癫痫，癫痫免疫模型，外伤性癫痫模型，皮质发育障碍动物模型；按照制备方法分为：化学药物模型，金属植入，电刺激等。难治性癫痫的病因和发作机制复杂，发作无预见性，发作程度难以控制。Loscher(Loscher W.Animal models of intractable epilepsy.Prog Neurobiol，1997，53：239-258.)提出的在实验研究中，判断癫痫动物模型是否适合人类癫痫的标准有三条：①模型的生物电发放和发作形式必须与人类癫痫一致。②如若无发作症状，EEG须显示有生物电异常发放，称为癫痫样放电。③抗癫痫药不能控制其满意发作。目前国际上唯一被认可的耐药性癫痫模型是由Loscher等建立的大鼠苯妥英钠杏仁核电点燃癫痫模型，但是该模型的缺点是，动物不易饲养，点燃率低，容易死亡，而且大鼠与人的种属差异，其解剖结构、生理功能及生化代谢与人差别较大，分子生物学研究生物可信度不高。

至今国内外研究者用海人酸作为致痫剂，已经采用不同的给药途径和方式在多种动物身上建立急性癫痫模型、慢性点燃模型，并广泛用于癫痫发生机制的研究，结果表明海人酸所致癫痫与临床颞叶癫痫发作类型相似，具有建立过程可重复性强，剂量小，点燃率高等优点，是一种较好的癫痫模型。

灵长类动物与人的亲缘关系最近，国内外至今仍无恒河猴海人酸癫痫模型的相关报道。

发明内容

为解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种制备癫痫发作动物模型的方法。

因此，在第一个方面，本发明提供了一种制备灵长类动物癫痫发作模型的方法，该方法包括将剂量为6.0-9.0μl的2.0μg/μl海人酸施用于灵长类动物的右侧海马来诱发癫痫发作。

在第二个方面，本发明提供了通过本发明的方法制备的癫痫发作动物模型。

在本发明中，灵长类动物包括但不限于，猴科、猩猩科(包括大猩猩、黑猩猩等)、猿类(包括长臂猿、类人猿等)，优选恒河猴。

在一个优选的实施方案中，海人酸通过立体定向方法微量注射给药。

本发明选择了与人类亲缘关系最近的恒河猴作为受试对象，初步建立恒河猴癫痫发作模型，观察行为学及脑电图改变。实验结果表明，实验组的4只恒河猴通过立体定向技术向海马微量注射海人酸后8-12分钟内，均发生了由部分性发作到全面强直-阵乱发作即1-5级痫性发作，且用脑电图记录到了不同时期的癫痫放电，证实了海人酸在灵长类动物中的致痫作用。本次试验，恒河猴经历了伴咀嚼的吞咽动作及呼吸加快，并出现恶心呕吐胃内容物等自主神经系统症状，逐渐发展到单侧肢体的不自主抽搐，继而发展到双侧肢体的不自主抽搐，湿狗样抖动以及全身强直-阵挛等即部分性发作继发全面强直阵挛性发作的全过程，发作形式与人类的颞叶癫痫极为相似。