[发明专利]一种鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的单链抗体ZL1、其制备方法及其用途

权利要求书

1.一种鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的单链抗体ZL1，是与原核表达的新城疫病毒P蛋白结合的单链抗体，其至少具有如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的轻链可变区、如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的重链可变区，和位于轻链可变区与重链可变区之间的中间连接肽。

2.如权利要求1所述的单链抗体ZL1，其特征在于其具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。

3.一种编码如权利要求1所述的单链抗体的基因，其特征在于其具有SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

4.如权利要求3所述的基因，其特征在于所述核苷酸序列中进一步包含内切酶位点NotI、NcoI，其中NcoI为CCATGG，NotI为GCGGCCGC。

5.含有权利要求3-4任一项所述的基因的表达载体。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于所述载体为原核表达载体。

7.如权利要求6所述的表达载体，其特征在于所述载体为pOPE101-XP载体。

8.一种制备如权利要求1所述的鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的单链抗体的方法，包括以下步骤：

（1）采用RT-PCR直接从ND GA/VA疫苗免疫的鸡脾脏RNA中扩增出抗体编码基因的重链可变区基因和轻链可变区基因；

（2）利用SOE-PCR法将linker与VH基因和VL基因相连构建鸡源性单链抗体编码基因；

（3）将步骤（2）的鸡源性单链抗体编码基因克隆到原核表达载体pOPE101-XP中，构建重组质粒；

（4）将步骤（3）的原核表达载体pOPE101-XP转化入E.coli JM109感受态细胞，培养、表达单链抗体；

（5）将步骤（4）表达的单链抗体用以原核表达的新城疫病毒P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA进行筛选，阳性克隆即为抗新城疫病毒P蛋白的单链抗体ZL1；

（6）分离纯化步骤（5）所得阳性克隆培养产物即获得所述鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的单链抗体ZL1。

9.如权利要求1或2所述的鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的单链抗体ZL1在用于制备鸡新城疫的预防和/或治疗药物中的应用。