[发明专利]水飞蓟宾在制备治疗肺炎药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及水飞蓟宾在制备治疗肺炎药物中的应用，属于医药领域。

一、背景技术

水飞蓟宾(Silibinin)来源于菊科植物水飞蓟的果实或种子，是一种黄酮木脂素类化合物，具有良好的抗氧化和抗炎的特性，且大剂量使用时对人和动物几乎没有毒性，在临床中已经用于保肝药物进行治疗肝部损伤，同时有研究表明水飞蓟宾具有抑制肺癌细胞的作用。但截至目前国内外未见水飞蓟宾治疗细菌性肺炎的报道。

金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、化脓性链球菌等均能引起细菌性肺炎。细菌耐药性的不断增加，造成了许多难治疗的细菌性肺炎病例的出现，尤其在免疫能力较弱的儿童和老人以及免疫缺陷者中死亡率极高。其中以金葡菌感染所导致的肺炎病情较为严重，常规情况下人们使用苯唑西林和氯唑西林对此肺炎进行治疗，但是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的出现，导致治疗失败和较高的死亡率，给肺炎的治疗带来了更大的压力。因此，开发新的安全有效的药物具有十分重要的意义。水飞蓟宾是药用植物水飞蓟的主要活性成分，本发明研究表明了水飞蓟宾对细菌性肺炎，尤其是金葡菌引起的肺炎具有良好的治疗效果。

二、发明内容

水飞蓟宾的分子结构如下：

本发明通过家兔红细胞溶血试验、人肺上皮细胞(A549)损伤的保护试验以及小鼠金葡菌肺炎模型证实水飞蓟宾对金葡菌感染有治疗作用。

三、具体实施方式

1.溶血试验

金葡菌ATCC 29213，ATCC10832，BAA-1717，NCTC8325-4分别于不同浓度的水飞蓟宾共培养至对数生长后期(0D₆₀₀分别是2.5，2.0，2.0，2.5)。取1.5ml共培养物，离心取上清；在1.5ml离心管中加入875μl溶血素缓冲液、100μl细菌上清和25μl脱纤维兔血，混匀后于37℃孵育15min，后离心取上清，并在543nm测其光密度。

加入不同浓度的水飞蓟宾后对α-溶血素的抑制作用如下表1

表1.水飞蓟宾后对α-溶血素的抑制作用(％)

2.人肺上皮细胞(A549)损伤的保护试验

金葡菌NCTC 8325-4于TSB培养基中培养至0D_600nm＝0.5，取5ml的细菌培养物，离心并重悬于10ml的F12K培养基中。A549细胞用含10％胎牛血清F12K培养，以1.5×10⁴个细胞/孔铺于96孔板中，37℃、5％CO₂培养24小时。细胞贴壁后，加入100μl金葡菌悬液，并加入不同浓度的水飞蓟宾，置于细胞培养箱中于37℃、5％C02共培养8h。加live(green)/dead(red)试剂，后于激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察A549细胞的状态，活细胞显绿色，死细胞显红色。

结果表明，水飞蓟宾能够保护金葡菌α-溶血素介导的人肺上皮细胞(A549)损伤，该作用呈现剂量依赖性。

3.小鼠金葡菌肺炎的实验治疗学研究

3.1小鼠金葡菌肺炎模型

C57BL/6J小鼠(雄性，18-22g)经乙醚麻醉后，经鼻给予30μl金葡菌悬液(金葡菌8325-4)，小鼠平躺直至苏醒，建立小鼠金葡菌肺炎的模型。致死试验给予4×10⁸ CFUs的金葡菌，而组织病理学考察给予2×10⁸ CFUs的金葡菌。

3.2保护率试验

小鼠接种金葡菌后2h分别皮下注射100、50和25mg/kg(100μl)的水飞蓟宾，每6h给药一次。不给药对照组给与100μl的生理盐水，每组30只小鼠。按给药方案给药后，分别记录小鼠感染金葡菌24h，48h，72h后的死亡率。

结果表明，经水飞蓟宾处理后，显著降低小鼠金葡菌肺炎的死亡率(P＜0.05)。如表2.

表2.水飞蓟宾对小鼠金葡菌肺炎死亡率的影响