[发明专利]用于诊断纯发-甲外胚叶发育不良的方法和组合物

权利要求书

1.突变的HOXC13基因，其与SEQ ID NO:1相比具有至少1个非沉默突变，并且所述突变的HOXC13基因编码功能丧失的蛋白或导致PHNED的发生；

例如，所述非沉默突变选自添加，缺失和置换中的一种或多种；

例如，所述非沉默突变位于HOXC13基因的外显子区域；

例如，所述非沉默突变位于HOXC13基因的第1个外显子；

例如，所述非沉默突变位于：c.390；

例如，所述非沉默突变是：c.390C→A。

2.一种载体，其包含权利要求1的突变的HOXC13基因；

例如，所述载体选自克隆载体和表达载体；

例如，所述载体还包含与所述突变的HOXC13基因可操作地连接的表达控制序列，例如但不限于启动子，增强子和终止子；

例如，所述载体还包含选择标记。

3.一种宿主细胞，其包含权利要求1的突变的HOXC13基因或权利要求2的载体。

4.权利要求2的载体或权利要求3的宿主细胞的用途，其用于产生PHNED动物模型，或用于制备试剂盒，所述试剂盒用于产生PHNED动物模型。

5.诊断受试者是否患有PHNED或处于发展PHNED的风险中的方法，其包括，

1)获得来自所述受试者的核酸样品（例如，基因组DNA样品或总mRNA样品）；

2)在所述核酸样品中确定HOXC13基因中是否存在导致HOXC13基因编码功能丧失的蛋白的非沉默突变；和

3)如果存在所述非沉默突变，则判断受试者患有PHNED或处于发展PHNED的风险中；

例如，所述非沉默突变选自添加，缺失和置换中的一种或多种；

例如，所述非沉默突变位于HOXC13基因的外显子区域；

例如，所述非沉默突变位于HOXC13基因的第1个外显子；

例如，所述非沉默突变位于：c.390；

例如，所述非沉默突变是：c.390C→A。

6.用于诊断PHNED的诊断剂，其包含能够特异性扩增HOXC13基因的引物，或能够特异性检测HOXC13基因突变的探针；

例如，所述引物能够特异性扩增HOXC13基因的外显子，优选第1个外显子；

例如，所述引物的序列选自SEQ ID NO:3、4、5和6；

例如，所述引物是如SEQ ID NO:3和4所示的引物对，或如SEQ ID NO:5和6所示的引物对；

例如，所述突变位于HOXC13基因的外显子，优选第1个外显子，更优选地位于：c.390；

例如，所述突变是c.390C→A；

例如，所述引物或探针是经标记的。

7.一种试剂盒，其包含权利要求6的诊断剂；

优选地，所述试剂盒还包含其他试剂，例如用于PCR的试剂（例如dNTP和聚合酶），用于提取核酸的试剂。

8.权利要求6的诊断剂在制备用于检测HOXC13基因的突变和/或用于诊断PHNED的试剂盒中的用途。

9.用于测量HOXC13基因的表达水平的试剂（例如，引物和/或探针和/或抗体）在制备诊断剂中的用途，所述诊断剂通过下列来诊断受试者是否患有PHNED或处于发展PHNED的风险中：测量HOXC13基因在来自受试者的测试样品（例如皮肤样品）中的表达水平，其中，与对照样品（例如来自正常人的样品）中的表达水平相比，HOXC13基因在测试样品中的表达水平的下降指示，受试者患有PHNED或处于发展PHNED的风险中；

例如，所述试剂是能特异性扩增HOXC13基因的引物，和/或能与HOXC13基因特异性杂交的探针，和/或能特异性识别HOXC13蛋白的抗体；

例如，所述引物的序列选自SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8；

例如，所述引物是如SEQ ID NO:3和4所示的引物对，或如SEQ ID NO:5和6所示的引物对，或如SEQ ID NO:7和8所示的引物对。

10.用于诊断受试者是否患有PHNED或处于发展PHNED的风险中的诊断剂，其包含能特异性扩增HOXC13基因的引物，和/或能与HOXC13基因特异性杂交的探针，和/或能特异性识别HOXC13蛋白的抗体。