[发明专利]约氏乳杆菌在降低断奶仔猪肠道pH值中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及约氏乳杆菌在降低断奶仔猪肠道pH值中的应用。

背景技术

约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）属于厚壁菌门（Firmicutes）芽孢杆菌纲（Bacilli）乳杆菌目（Lactobacillales）乳杆菌科（Lactobacillaceae）乳杆菌属（Lactobacillus），1980年首次被分离，然而在分类学上一直将其划分为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）。1992年Fujisawa等通过生化实验和DNA杂交实验将其定名为约氏乳杆菌。约氏乳杆菌主要存在于动物和人的消化道中，且为优势菌群。

欧盟食品安全局（EFSA）会分别于2009年和2011年两次发布了针对约氏乳杆菌的健康申明，申明指出约氏乳杆菌具有减少肠道内病原菌的微生物，增强天然防御和免疫系统和保持皮肤健康。并且欧盟与2010年对约氏乳杆菌进行了安全资格认定（qualified presumption of safety,QPS）批准其在饲料和食品中使用。综合目前关于约氏乳杆菌的文献报道，其对动物的益生功能主要体现在以下几方面：1.约氏乳杆菌对动物天然防御系统及免疫机能具有调节作用，其具体调控位点，如TGFβ，TLR9，NF-κB，IgA，往往是动物机体免疫应答反应的起始受体，因此其预防动物疾病的作用机理可能是在特定时期刺激动物免疫系统，早期激活下游免疫应答进而防止疾病发生；2.约氏乳杆菌表现出对肠道病原菌的生长抑制作用。3.约氏乳杆菌对病原菌的排他性竞争作用。约氏乳杆菌对一些病原菌如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌在肠道上皮细胞上的定殖产生空间位阻，可防止病原菌对肠道上皮细胞的侵染，减少疾病发生。

2010年我国卫生部办公厅将约氏乳杆菌收录到《可用于食品的菌种名单》中，批准其作为具有益生功能的食品添加剂使用。目前在国内尚未见有将约氏乳杆菌作为添加剂添加食品和饲料添加剂的产品面世，其在动物畜禽养殖上的应用也鲜见报道，将约氏乳杆菌开发成动物微生态饲料添加剂，为填补国内空白，筛选益生性能优良的约氏乳杆菌，对促进我国畜禽养殖水平意义重大，可在畜禽养殖中发挥更大作用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供约氏乳杆菌CGMCC No.4926在降低断奶仔猪肠道pH值中的应用。

本发明的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)，是通过体外耐酸和耐胆盐筛选得到的一株均有潜在益生功能的约氏乳杆菌，命名为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)YS-12，并于2011年6月8日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心进行了保藏，保藏号为CGMCC No.4926。

其中，所述的约氏乳杆菌YS-12的筛选过程如下：

（1）收集菌种

截取健康猪结肠后半段，用生理盐水冲洗三次，用牙签多次挂取肠道上皮上的附着物，放入10mL的生理盐水中，作为样品原液，对原液进行10倍梯度稀释。

（2）菌种培养

将每个稀释度，取100微升涂布于MRS平板上，37℃倒置培养24小时。

（3）菌种鉴定

挑取平板上的单菌落进行对其16SrRNA进行菌落PCR鉴定，通过在数据库中进行序列比对，发现其16S序列（GenBank登录号：HQ641209）与数据库中已知的约氏乳杆菌的16S序列的相似度达99%，进一步通过理化实验证实其为约氏乳杆菌。

（4）菌种筛选

1）将菌体重悬于PBS液后，梯度稀释至10^-2，用移液器吸取10^-2稀释液100微升分别加入900微升0.3%的胆盐溶液和PBS（对照）中，37℃保温3小时。

2）将菌体重悬于PBS液后，梯度稀释至10^-2，用移液器吸取10^-2稀释液100微升分别加入900微升pH3.0的缓冲液和PBS（对照）中，37℃保温3小时。