[发明专利]焦磷酸测序法检测抗叶酸类制剂个体化用药基因多态性的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种焦磷酸测序法检测抗叶酸类制剂个体化用药基因多态性的试剂盒，其特征在于，包括如下引物：

（1）扩增引物：

     上游引物：5’-GGT GTC AAA GTG TCA CTG AAC TA-3’；

          5’- AAG GCC ACC CCG AAG CAG GGA GCT -3’，该引物5’标记生物素；

  下游引物：5’-CTC TTG TTT TAG ATG TTA AAT CAC-3’，该引物5’标记生物素；

               5’- GGG GAC GAT GGG GCA AGT -3’；

（2）测序引物：5’- GCT GAC TTT CCA GAC AAC -3’；

               5’- CGT GAT GAT GAA ATC G -3’。

2.一种应用权利要求1所述的试剂盒检测抗叶酸类制剂个体化用药基因多态性的方法，包括如下步骤：

（1）DNA提取；

（2）聚合酶链反应：

配制50μl PCR扩增体系，包含：10×PCR buffer 10.0μl， dNTP 2.0μl，上游引物 1.0μl， 下游引物1.0μl， rTaq1.0μl，水31.0μl，模板4.0μl；循环程序为：95℃5min预变性；依次在95^oC 30S，52^oC 30S，72^oC 30S，进行38个循环； 72^oC 保持5min，最终保持在4℃，得扩增产物；

（3）焦磷酸测序单链样本纯化；

（4）焦磷酸测序及结果分析。