[发明专利]一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种鲨鱼蛋白抗氧化肽，本发明还涉及该鲨鱼蛋白抗氧化肽的制备方法，本发明还涉及该鲨鱼蛋白抗氧化肽的用途。

背景技术

抗氧化剂是一类可以阻止氧气不良影响，帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害和保护食物免受氧化损伤变质的一类物质。抗氧化剂主要分为天然和化学合成两种类型，而化学合成抗氧化剂由于价格便宜、活性好，因而被广泛地应用到食品工业中。然而，现有研究表明化学合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ），除TBHQ外，在不同程度上对人体的肝脏、肾脏等器官均有不利影响，并容易产生过敏反应。因此，基于食品安全的考虑，化学合成抗氧化剂的应用受到了较大影响，部分发达国家已限量或禁止使用对人体有毒副作用的化学合成抗氧化剂，比如北欧已禁止使用BHA和BHT，美国、日本及西欧国家也已限量使用。因此，寻找高效、低毒的天然食品抗氧化剂成为世界各国科学家的研究热点。

目前，已从多种植物、动物组织中提取得到了抗氧化活性显著的物质，如茶叶中的茶多酚、大豆中的异黄酮、河螯虾外壳中的虾青素，枸杞中的多糖，蔬菜水果中的类胡萝卜素和抗坏血酸等物质。而已有的研究揭示，多肽类物质也具有显著的抗氧化活性，如存在于肌肉组织中的肌肽不仅可以有效抑制脂肪氧化，而且在肉制品贮藏时有护色作用；谷胱甘肽（GSH）亦具有抗氧化作用和整合解毒作用，半具有显著的抗氧化作用；而以生物蛋白为原料，采用酶解技术得到的蛋白酶解物及其组成多肽也具有显著的抗氧化活性，如牛瑞等研究发现鳕鱼皮酶解多肽具有显著的抗氧化活性；刘成梅等研究发现罗非鱼鱼皮多肽多肽对二苯代苦味酰（DPPH）自由基的抑制作用强于对超氧阴离子自由基的抑制作用；吴建中等研究发现大豆蛋白酶解多肽具有抗亚油酸过氧化能力和清除自由基能力；徐怀德等研究发现甲鱼蛋白的木瓜蛋白酶酶解产物可清除羟基自由基和超氧阴离子自由基和DPPH自由基；王勇刚研究发现鱼精多肽中的二肽（Pro-Arg）可显著清除羟自由基，而且还可有效降低MRC-5（胚肺细胞）胞内自由基的含量，从而保护细胞避免氧化损伤。

申请人在实验中发现，以路氏双髻鲨鱼肉蛋白为原料，利用酶解技术制备抗氧化多肽的工艺研究处于空白阶段，而以酶解产物为材料制备高活性抗氧化肽及其应用更是未见报道。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种鲨鱼蛋白抗氧化肽，该抗氧化肽安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可清除自由基和抑制脂质过氧化作用。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种鲨鱼鱼肉蛋白抗氧化肽的制备方法，工艺科学合理、易操作。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种鲨鱼鱼肉蛋白抗氧化肽的应用。

本发明为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为：一种鲨鱼蛋白抗氧化肽，其特征在于该抗氧化肽的氨基酸序列为Leu-Asp-Lys，ESI-MS检测给出分子离子峰分子量m/z 375.30[M+H]⁺。

本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种鲨鱼蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）以脱脂鲨鱼鱼肉作为原料，按固液比1g:15mL~20mL加入缓冲液，用HCl或NaOH调节pH到5.0~7.0，得混合液；

2）将混合液温度升至50℃~60℃搅拌预热5min~10min，按照脱脂鱼肉质量的0.8%~1.2%加入木瓜蛋白酶，酶解温度为50℃~60℃，酶解时间1h~3h，得酶解产物；

3）将得到的酶解产物先经灭酶处理得酶解液，再将酶解液依次经脱盐、超滤和层析，得到抗氧化肽。

作为改进，所述步骤1）中的脱脂鲨鱼鱼肉的制备过程为：将洗净、去骨和皮的鲨鱼肉按照固液比1g:1mL~2mL放入缓冲液中，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1:2~4放入乙醚中脱脂20~25h，3~5℃、4000~5000rpm，10~15min离心除去乙醚，收集固形物即得到脱脂鲨鱼鱼肉。

作为优选，所述步骤2）中的木瓜蛋白酶的酶活力≥1.5×10⁶U/g。

作为改进，所述步骤3）中的灭酶处理为：将酶解产物升温至90℃~95℃，并于此温度保持10min~15min后，冷却至15℃~20℃，然后离心，得酶解液。

再改进，所述步骤3）的脱盐、超滤和层析的具体过程为：