[发明专利]一种环境雌激素电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种环境雌激素电化学免疫传感器的制备方法，步骤如下：

(1)用壳聚糖(Chit)溶液分散石墨烯(GS)，超声至形成分散均匀的石墨烯-壳聚糖溶液(GS-Chit)；

所述的分散均匀的GS-Chit，GS浓度为0.5～1.5mg·mL^-1，Chit浓度为1.0～3.0mg·mL^-1；

(2)用原位还原法将氯金酸在介孔二氧化硅(SBA-15)的孔道中还原，得到金杂化的介孔二氧化硅纳米复合材料(AuSBA-15)；

所述的氯金酸和SBA-15的质量比为1∶0.5～1.5；

(3)将交联剂戊二醛、AuSBA-15溶液和环境雌激素抗体(Ab)均匀混合，制备成纳米复合材料与抗体的混合液(AuSBA-15-Ab)；

交联剂戊二醛的质量分数为2.5％，AuSBA-15溶液浓度为3.5mg·mL^-1，环境雌激素抗体浓度为1.0mg·mL^-1；

所述的交联剂戊二醛、AuSBA-15溶液和环境雌激素抗体的体积比为1∶1.5～2.5∶1～3；

所述的AuSBA-15-Ab是将交联剂戊二醛、AuSBA-15溶液、环境雌激素抗体(Ab)放在振荡器上振荡10～30h后离心洗涤，用pH为6.8～7.8的磷酸盐缓冲液(PBS)稀释得到；

(4)利用电极表面自组装技术将GS-Chit和AuSBA-15-Ab修饰在电极表面；

(5)将浓度为100μg·mL^-1的牛血清白蛋白(BSA)滴涂在步骤4)AuSBA-15-Ab修饰的电极表面，湿润保持1h后用水冲洗掉多余的BSA，置于4℃下保存待用，制备成无标记型电化学免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的一种环境雌激素电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于所述的GS-Chit和AuSBA-15-Ab修饰到电极表面，步骤如下：

(1)依次用不同粒径的三氧化二铝抛光粉抛光处理直径为5mm的玻碳电极，用乙醇超声处理，然后将电极置于铁氰化钾溶液中，在-0.6～0.6V扫描，峰电位差小于100mV，吹干待用；

(2)将制备的分散均匀的GS-Chit滴涂到电极表面，室温晾干；

(3)将戊二醛滴涂到步骤(2)GS-Chit修饰的电极表面，湿润保持1h，用水冲洗掉多余的戊二醛；

(4)将制备的AuSBA-15-Ab混合均匀后滴涂到步骤(3)戊二醛修饰的电极表面，湿润条件下晾干。

3.根据权利要求1或2所述的一种环境雌激素电化学免疫传感器，其特征在于包括如下步骤：将制备好的电极作为工作电极、饱和甘汞电极作为参比电极、铂丝电极作为辅助电极，组成三电极系统，结合电化学工作站CHI760D，用于水及食品中环境雌激素的检测。

所述的环境雌激素为雌二醇、雌三醇、己烯雌酚或炔诺酮。