[发明专利]高灵敏拉曼光谱检测DNA的一种方法

权利要求书

1.本发明涉及一种高灵敏拉曼光谱检测DNA的方法。这个方法利用在磁珠表面上的链替代聚合和银增强作用来实现信号的双重放大。在目标DNA分子与固定在磁珠表面的分子信标探针杂交后，分子信标环被打开，引物修饰的拉曼染料-银纳米复合物通过引物与分子信标茎端的杂交连接到磁珠上，诱导DNA链发生聚合反应而释放目标DNA分子，被释放的目标DNA分子与固定在另一个磁珠上的分子信标杂交，产生另一个聚合循环。在循环链替代聚合完成后，利用磁珠分离链替代产物，并在产物连接的纳米复合物表面沉积一层银纳米壳层，增强染料的拉曼信号。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的方法在磁珠表面结合链替代聚合和银增强作用来实现双重信号放大。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的方法用磁珠表面结合的分子信标探针与目标DNA分子杂交而打开信标茎端，从而通过引物与茎端的杂交将引物修饰的拉曼染料-银纳米复合物连接到磁珠上。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于引物可诱导DNA链发生聚合反应而释放目标DNA分子，进一步产生另一个聚合循环，从而实现信号放大。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于在拉曼染料-银纳米复合物表面沉积一层银纳米壳层，增强拉曼检测信号。

6.一种利用链替代聚合和银增强作用双信号放大的拉曼光谱检测DNA的方法，其具体分析步骤如下：

(1)在反应混合物中，目标DNA分子首先与固定在磁珠表面的分子信标探针杂交，打开分子信标环。

(2)引物修饰的拉曼染料-银纳米复合物与被打开的分子信标茎端进行杂交；

(3)在聚合酶与dNTP存在下，进行循环链替代聚合；

(4)用外加磁场分离固定在磁性纳米颗粒表面的链替代产物，进行银增强反应；

(5)检测被增强的染料拉曼信号，利用DNA的标准溶液获得检测的工作曲线；

(6)从工作曲线求出样品中不同DNA的浓度。